紫龍金片調(diào)控S180荷瘤小鼠免疫格局與抑瘤機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　本研究擬通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)觀察中藥紫龍金片對(duì)S180肉瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用，測(cè)量計(jì)算免疫器官指數(shù)，并利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)小鼠外周血中T淋巴細(xì)胞亞群、B淋巴細(xì)胞亞群、活化B細(xì)胞、成熟B細(xì)胞、活化T細(xì)胞、NK細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞以及細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、TNF、IFN-γ的表達(dá)情況，初步探索中藥紫龍金片的抑瘤作用機(jī)制與免疫功能調(diào)控的相關(guān)性，為中藥抗腫瘤的臨床應(yīng)用提供了一定的基礎(chǔ)。

2、r>　　方法：
　　1.細(xì)胞復(fù)蘇與傳代：將S180細(xì)胞凍存管水浴離心后得到S180細(xì)胞懸液，加入含有1640培養(yǎng)液、10％胎牛血清及青-鏈霉素培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，放入5%CO2、恒溫37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)，取對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的S180肉瘤細(xì)胞，經(jīng)胰蛋白酶消化離心去上清，用生理鹽水將細(xì)胞濃度調(diào)整為2×107個(gè)/ml后，注射于小鼠腹腔內(nèi)進(jìn)行腹腔傳代。
　　2.荷瘤小鼠模型的建立與分組：將S180肉瘤細(xì)胞懸液接種于昆明鼠左前肢腋部后緣

3、部位的皮下構(gòu)建S180荷瘤動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，隨機(jī)分組(每組10只)。
　　3.紫龍金對(duì)荷瘤小鼠抑瘤作用的研究：第8天起按組別給予藥物干預(yù)，測(cè)量小鼠體重，連續(xù)12天，停藥24小時(shí)后進(jìn)行眼眶取血，處死小鼠，剝離腫瘤、脾臟、胸腺，稱取瘤重、脾重、胸腺重量，HE染色觀察腫瘤組織結(jié)構(gòu)及腫瘤細(xì)胞的凋亡壞死情況，并計(jì)算抑瘤率、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)。
　　4.紫龍金對(duì)荷瘤小鼠免疫格局調(diào)控的研究：利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)小鼠外周血中T淋巴細(xì)胞亞群、B

4、淋巴細(xì)胞、活化B細(xì)胞、成熟B細(xì)胞、活化T細(xì)胞、NK細(xì)胞、NK-T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞以及細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、TNF、IFN-γ的表達(dá)，并分析其表達(dá)情況。
　　5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：使用 SPSS19.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果：
　　1.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，荷瘤組小鼠體重與正常組相比明顯減少（P<0.05），化療組小鼠的體重與其余各荷瘤組小鼠相比均明顯減少（P<0.05）。<

5、br>　　2.化療和紫龍金聯(lián)用組抑瘤率最高，為22.1%。紫龍金組抑瘤率為10.24%，化療組抑瘤率為16.98%，二者間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　3.荷瘤組脾臟指數(shù)與正常組相比明顯升高（P<0.01），紫龍金組及兩藥聯(lián)用組與荷瘤組比較脾臟指數(shù)明顯減少（P<0.05），其中化療和紫龍金聯(lián)用組脾臟指數(shù)與正常組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。實(shí)驗(yàn)小鼠各組間胸腺指數(shù)無(wú)顯著性差異（P>0.05）。
　　4.紫龍金片使S1

6、80荷瘤小鼠外周血中活化B淋巴細(xì)胞含量接近正常組，與正常組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），并促進(jìn)早期活化B淋巴細(xì)胞向活化B淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，使其轉(zhuǎn)化率接近1比1。
　　5.與荷瘤組相比，紫龍金可提高小鼠外周血中CD3+、CD4+、CD25+、CD69+、CD19+、NK細(xì)胞、IL-6、IL-10的表達(dá)，并降低Treg細(xì)胞、TNF、IFN-γ、IL-17A的表達(dá)，化療和紫龍金聯(lián)用組可提高外周血中CD8+、NK-T細(xì)胞的表達(dá)，使其與其

7、他治療組相比含量達(dá)到最高。
　　結(jié)論：
　　1.紫龍金片對(duì)S180荷瘤小鼠腫瘤的生長(zhǎng)具有抑制作用，其與化療藥聯(lián)用時(shí)抑瘤作用效果最佳。
　　2.紫龍金片在一定范圍內(nèi)調(diào)節(jié)腫瘤機(jī)體免疫抑制功能，維持腫瘤機(jī)體內(nèi)細(xì)胞免疫的平衡。
　　3.紫龍金片可提高活化B淋巴細(xì)胞的含量，促進(jìn)早期活化B淋巴細(xì)胞向活化B淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，進(jìn)而促進(jìn)B淋巴細(xì)胞的發(fā)育。
　　4.紫龍金片可以降低前炎癥細(xì)胞因子IL-17的表達(dá)減輕腫瘤機(jī)體的炎癥