SD大鼠山仙顆粒含藥血清對S-180肉瘤細(xì)胞Bcl-2、Bax表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過SD大鼠山仙顆粒(SXG)含藥血清對S-180肉瘤細(xì)胞生長的抑制作用及對凋亡相關(guān)基因Bcl-2/Bax表達(dá)的影響，探討其臨床抗腫瘤的分子機(jī)制。
　　 實(shí)驗(yàn)方法：
　　 (1)SD大鼠血清制備：隨機(jī)分組后連續(xù)給藥7d，末次給藥2h后，腹腔注射麻醉、頸動(dòng)脈采血、離心分離血清，滅活補(bǔ)體，微孔濾膜將血清過濾，分裝后凍存?zhèn)溆谩?br>　　 (2)將體外擴(kuò)增培養(yǎng)的S-180肉瘤細(xì)胞制備成1×105個(gè)·mL-1細(xì)胞懸液，將

2、其置入不同濃度的SD大鼠SXG含藥血清及正常SD大鼠血清中，分成四組，依次為：空白組(90％RPMI-1640培養(yǎng)液、10％胎牛血清)、對照組(90％RPMI-1640培養(yǎng)液、10％正常SD大鼠血清)、含藥血清組1(10％SD大鼠SXG含藥血清、90％RPMI-1640培養(yǎng)液)、含藥血清組2(1％SD大鼠SXG含藥血清、9％胎牛血清、90％RPMI-1640培養(yǎng)液)，MTT比色法檢測不同血清作用于S-180肉瘤細(xì)胞24h、48h、72h

3、后的各組平均OD值，并計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率。
　　 (3)按以上分組，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔，分別培養(yǎng)24h、48h、72h后收集細(xì)胞制成細(xì)胞涂片，用免疫細(xì)胞化學(xué)法(SABC)和免疫熒光化學(xué)法(FITC)檢測S-180肉瘤細(xì)胞在不同血清作用下凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 (1)SXG含藥血清組分別在不同時(shí)間段與對照組抑制率相比較，各劑量組對S-180肉瘤細(xì)胞均有明顯抑制作用，且隨著含藥血清劑量

4、增加和作用時(shí)間的延長而抑制率增高。SXG含藥血清對S-180肉瘤細(xì)胞的增殖抑制在濃度與時(shí)間之間存在交互作用(P<0.01)，且濃度或時(shí)間具有單獨(dú)效應(yīng)，即隨著濃度增加，其對S-180肉瘤細(xì)胞的增殖抑制增強(qiáng)(P<0.01)；隨著作用時(shí)間延長，其抑制作用也增強(qiáng)(P<0.01)。大劑量組作用72h后細(xì)胞抑制率為46.69％，明顯高于同時(shí)間段小劑量組的抑制33.49％
　　 (P<0.01)。
　　 (2)免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測S-1

5、80肉瘤細(xì)胞中Bcl-2/Bax表達(dá)：空白組和對照組在作用S-180肉瘤細(xì)胞24h、48h、72h后，分別做組間比較和組內(nèi)比較，Bcl-2/Bax表達(dá)無差異(P>0.05)。方差分析結(jié)果顯示SXG含藥血清組1(大劑量)、SXG含藥血清組2(小劑量)、對照組中S-180肉瘤細(xì)胞Bcl-2/Bax表達(dá)有差異(P<0.05)，即隨著SD大鼠SXG血清劑量增加，Bcl-2表達(dá)降低(P<0.01)，Bax表達(dá)上升(P<0.05)。含藥血清組1、2

6、組內(nèi)比較Bcl-2/Bax有差異(P<0.05)，即隨作用時(shí)間的延長，Bcl-2表達(dá)降低(P<0.01)，Bax表達(dá)上升(P<0.05)。
　　 (3)免疫熒光化學(xué)法檢測S-180肉瘤細(xì)胞中Bcl-2/Bax的表達(dá)：在血清分別作用24h，48h，72h后熒光顯微鏡下觀察，對照組和空白組在各時(shí)間段Bcl-2熒光均為閃亮綠色，呈顆粒狀，分布于胞漿及核膜，其熒光強(qiáng)度無差異(P>0.05)。SXG含藥血清組Bcl-2熒光強(qiáng)度均低于對照組

7、(P<0.05)，隨作用時(shí)間延長而減弱(P<0.05)，大劑量組熒光強(qiáng)度均低于同時(shí)間段小劑量組(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對照組和空白組各時(shí)間段Bax熒光較弱，但清晰可見，熒光強(qiáng)度無差異(P>0.05)，SXG含藥血清組熒光強(qiáng)度均高于對照組(P<0.05)，且隨作用時(shí)間延長而增強(qiáng)(P<0.05)，隨劑量增大而增強(qiáng)(P<0.05)。
　　 結(jié)論：SD大鼠SXG含藥血清可明顯抑制體外培養(yǎng)的S-180肉瘤細(xì)胞增殖，并能下調(diào)抑凋