拉莫三嗪對(duì)癲癇大鼠學(xué)習(xí)記憶及Bax、Bcl-2表達(dá)的影響.pdf

1、背景：癲癇發(fā)作可導(dǎo)致繼發(fā)性腦損傷，而海馬是腦損傷最容易受累的部位。Bax和Bcl-2是腦損傷后細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)蛋白和凋亡抑制蛋白。流行病學(xué)調(diào)查及臨床研究均證實(shí)發(fā)育階段長(zhǎng)期反復(fù)癲癇發(fā)作可損害學(xué)習(xí)、記憶等認(rèn)知功能。目前癲癇發(fā)作的治療主要是藥物治療，目前普遍認(rèn)為傳統(tǒng)抗癲癇藥物(AntiepilepticDrugs，AEDs)對(duì)認(rèn)知功能的影響較大，而對(duì)新型AEDs對(duì)認(rèn)知功能的影響了解較少。拉莫三嗪(lamotrigine，LTG)是一種新型AED

2、s，其對(duì)癲癇發(fā)作后腦損傷的保護(hù)作用機(jī)制以及對(duì)患者認(rèn)知功能的影響等方面的研究近年來一直是學(xué)者們關(guān)注的熱點(diǎn)問題。
　　 目的：通過觀察LTG干預(yù)大鼠慢性癲癇模型發(fā)作情況和學(xué)習(xí)記憶的改變，檢測(cè)其海馬組織中Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)情況，分析癇性發(fā)作過程中大鼠的行為和學(xué)習(xí)記憶是否與大鼠海馬組織中Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)水平有關(guān)、LTG的保護(hù)作用是否與海馬中Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)水平有關(guān)，大鼠的行為和學(xué)習(xí)記憶水平、海馬組織中Bax、

3、Bcl-2蛋白表達(dá)水平是否與LTG的劑量有關(guān)，為臨床應(yīng)用LTG及其劑量選擇提供理論依據(jù)。
　　 方法：選用6周健康雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠100只。隨機(jī)分為正常組、模型組、LTG低劑量組、LTG中劑量組、LTG高劑量組，每組20只。每天每只大鼠腹腔注射戊四氮(Pentetrazole，PT2)35 mg/kg制備癲癇模型，正常組給予同體積生理鹽水。觀察其行為學(xué)變化30min。行為學(xué)判斷按Racine分級(jí)法連續(xù)

4、出現(xiàn)3次Ⅲ級(jí)以上發(fā)作作為點(diǎn)燃標(biāo)準(zhǔn)。全部點(diǎn)燃后(約2周)，按LTG最大推薦劑量(600mg/d)的1/30、1/20、1/10分為低、中、高劑量組，即LTG低劑量組[20mg/(kg·d)]、中劑量組[30mg/(kg·d)]、高劑量組[60mg/(kg·d)]；正常組和模型組予以等體積生理鹽水。LTG與生理鹽水配成所需濃度，大鼠給藥容積1mL/100g，每天灌胃給藥一次，共2周。造模第31天予以Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，連續(xù)5d，比較每組

5、大鼠在迷宮測(cè)試中每日各時(shí)間點(diǎn)，第5天進(jìn)行記憶與判斷測(cè)驗(yàn)。各組大鼠水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，經(jīng)心臟灌注固定取腦。通過HE染色了解其海馬組織的病理學(xué)變化；采用免疫組織化學(xué)法觀察其Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)變化。各組數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，應(yīng)用SPSS17.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，多樣本均數(shù)的兩兩比較采用單因素方差分析，以P<0.05作為顯著性檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。
　　 結(jié)果：1.正常對(duì)照組無癇性發(fā)作；模型組有癲癇發(fā)作，發(fā)作潛伏期最短(1.7

6、0±0.79)min，但持續(xù)時(shí)間最長(zhǎng)(6.38±2.20)min；低劑量組、中劑量組、高劑量組均有癇性發(fā)作，但發(fā)作級(jí)別降低，其中高劑量組潛伏期最長(zhǎng)(6.81±1.86)min，持續(xù)時(shí)間最短(2.16±1.32)min；與模型組比較，低劑量組、中劑量組、高劑量組癲癇發(fā)作的潛伏期延長(zhǎng)，發(fā)作級(jí)別降低；模型組與正常組癲癇發(fā)作潛伏期和持續(xù)時(shí)間比較差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；低劑量組、中劑量組、高劑量組與模型組癲癇發(fā)作潛伏期和持續(xù)時(shí)間比較

7、差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；
　　 2.Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，大鼠定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：正常組、模型組、LTG低、中、高劑量組的第一天逃避潛伏期分別為(25.15±1.39)s、(60.08±1.17)s、(54.50±0.93)s、(37.93±1.23)s、(36.38±0.83)s。各組第二天的逃避潛伏期分別為(20.58±0.86)s、(61.22±1.64)s、(58.59±0.91)s、(30.70±0.95

8、)s、(30.63±0.95)s。各組第三天的逃避潛伏期分別為(15.45±0.61)s、(59.59±0.63)s、(57.31±1.06)s、(30.47±0.57)s、(25.16±1.71)s。各組第四天的逃避潛伏期分別為(12.64±0.86)s、(55.62±0.40)s、(56.57±1.61)s、(27.69±0.82)s、(20.59±0.95)s。與正常組相比，模型組大鼠的逃避潛伏期明顯增加；LTG低、中、高劑量組與

9、模型組相比，逃避潛伏期明顯縮短。空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：模型組記憶探索正確時(shí)間為(26.01±2.21)s，與正常組(48.77±3.40)s比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；大鼠120 s內(nèi)在原放有平臺(tái)的象限內(nèi)停留的時(shí)間，LTG低、中、高劑量組記憶探索正確時(shí)間分別為(27.85±1.05)s、(37.96±0.97)s、(39.82±1.34)s，與模型組相比明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 3.海馬組織病

10、理變化，模型組、LTG治療組(低劑量組、中劑量組、高劑量組)海馬CA1區(qū)小錐體細(xì)胞、CA3區(qū)大錐體細(xì)胞及DG區(qū)顆粒細(xì)胞排列較疏松雜亂，可見海馬區(qū)細(xì)胞腫脹，邊緣欠清晰，胞核、胞質(zhì)深染，染色質(zhì)邊集凝集成塊狀，細(xì)胞空泡樣變性，胞膜內(nèi)陷，部分可見凋亡小體形成；且模型組較LTG各組嚴(yán)重，可見點(diǎn)片狀壞死的細(xì)胞；正常組海馬CA1區(qū)小錐體細(xì)胞、CA3區(qū)大錐體細(xì)胞及DG區(qū)顆粒細(xì)胞排列較整齊，可見海馬區(qū)細(xì)胞完整，邊緣清晰，胞核呈圓形、橢圓形，染色質(zhì)核內(nèi)分布

11、均勻，核仁清晰，僅少許神經(jīng)細(xì)胞空泡樣變性，染色質(zhì)邊集，體積增大，細(xì)胞腫脹呈圓形；
　　 4.大鼠海馬神經(jīng)元免疫組化染色Bax、Bcl-2比較：正常對(duì)照組中Bax、Bcl-2蛋白染色陽(yáng)性細(xì)胞低表達(dá)，其Bax和Bcl-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)分別為0.16±0.39、0.26±0.03；模型組Bax和Bcl-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)分別為0.35±0.05、0.27±0.03，和正常組比較Bax陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增加，而Bcl-2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)也增加；LTG低、中

12、、高劑量組Bax蛋白陽(yáng)性表達(dá)分別為0.29±0.45、0.24±0.04、0.20±0.05，LTG低、中、高劑量組Bcl-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)分別為0.33±0.28、0.36±0.04、0.38±0.02，與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；LTG低、中、高劑量組之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論：1.在PTZ致癇性發(fā)作過程中，大鼠的行為和學(xué)習(xí)記憶能力可能與其海馬區(qū)Bcl-2和Bax表達(dá)的變化有關(guān)。