槲皮素對(duì)多氯聯(lián)苯致大鼠胚胎著床障礙的保護(hù)作用機(jī)制.pdf

1、多氯聯(lián)苯(polychlorinated biphenyls，PCBs)是廣泛存在于自然界的環(huán)境類激素化合物，可通過(guò)模擬天然激素作用或干擾天然激素在體內(nèi)的合成、分泌、結(jié)合、代謝等過(guò)程，引起靶器官損害和致毒性能，降低靶器官對(duì)天然激素的敏感性，對(duì)動(dòng)物的內(nèi)分泌功能產(chǎn)生影響和危害，從而嚴(yán)重影響機(jī)體的生長(zhǎng)發(fā)育、生殖功能。懷孕動(dòng)物早期暴露于PCBs中會(huì)導(dǎo)致受精卵的著床率下降，胚胎發(fā)育異常，胚胎植入前退化，動(dòng)物生殖能力降低。故本研究運(yùn)用典型的類二嗯英

2、多氯聯(lián)苯Aroelor1254建立大鼠肝細(xì)胞和子宮內(nèi)膜細(xì)胞損傷模型及胚胎著床障礙模型，研究槲皮素對(duì)Aroclor1254所致的大鼠胚胎著床障礙的作用機(jī)制，為中藥預(yù)防和治療環(huán)境類激素所致動(dòng)物生殖機(jī)能障礙，提高家畜的繁殖力提供理論依據(jù)。
　　1.體外試驗(yàn):分離和培養(yǎng)懷孕大鼠的肝臟和子宮內(nèi)膜細(xì)胞，通過(guò)MTT法確定10μg/mL Aroclor1254是導(dǎo)致懷孕大鼠肝臟和子宮內(nèi)膜細(xì)胞損傷的最適濃度。通過(guò)RT-PCR、Western blo

3、t、ELISA等方法研究發(fā)現(xiàn)，Aroclor1254損傷的肝細(xì)胞腫大，出現(xiàn)空泡，胞質(zhì)少，輪廓不清晰，TNF-α和IL-6的含量顯著升高(P＜0.05)。10μmol/L槲皮素處理?yè)p傷的肝細(xì)胞后，細(xì)胞的空泡化得到明顯改善，CYP1A1、CYP2B1及CYP2E1的表達(dá)隨槲皮素濃度的增加和處理時(shí)間的延長(zhǎng)而呈升高的趨勢(shì)，TNF-α和IL-6的含量顯著降低(P＜0.05)。Aroclor1254損傷的子宮內(nèi)膜細(xì)胞皺縮，部分細(xì)胞腫脹，胞質(zhì)減少，甚

4、至出現(xiàn)空泡，TNF-α、IL-6和E2的含量顯著升高(P＜0.05)，P4的含量顯著降低(P＜0.05);50μmol/L槲皮素處理?yè)p傷的子宮內(nèi)膜細(xì)胞24h后，細(xì)胞的損傷現(xiàn)象明顯好轉(zhuǎn)，CYP2B1的表達(dá)呈升高趨勢(shì)，子宮內(nèi)膜細(xì)胞中TNF-α、IL-6和E2的含量顯著降低(P＜0.05)，P4的含量顯著上升(P＜0.05)。
　　2.體內(nèi)試驗(yàn):
　　(1)不同濃度的Aroclor1254灌服孕4-7d大鼠，RT-PCR和West

5、ern blot法檢測(cè)大鼠肝臟及子宮中CYP1A1、CYP2B1、CYP2E1 mRNA和蛋白的表達(dá)，ELISA法檢測(cè)肝臟、子宮及血清中TNF-α、IFN-γ、 IL-2、IL-4、IL-6、E2和P4的含量，并觀察肝臟和子宮的組織病理學(xué)形態(tài)，確定Aroclor1254阻礙大鼠胚胎著床的最適濃度。研究發(fā)現(xiàn)，不同濃度的Aroclor1254處理懷孕大鼠后，胚胎著床率隨Aroclor1254濃度的升高而下降(P＜0.05)，發(fā)育延遲胚和退化

6、變性胚比率呈上升的趨勢(shì)(P＜0.05)。CYP1A1、CYP2B1和CYP2E1的表達(dá)隨Aroclor1254濃度的升高而呈上升的趨勢(shì)。肝臟、子宮及血清中TNF-α、IFN-γ、IL-2和IL-6的含量顯著升高(P＜0.05)，IL-4的含量顯著下降(P＜0.05)。肝臟和子宮的組織病理學(xué)形態(tài)變化明顯:肝索排列紊亂，肝細(xì)胞腫大，細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)空泡;子宮壁增厚，平滑肌細(xì)胞排列呈旋渦狀，子宮腺上皮細(xì)胞出現(xiàn)空泡。1 mg/100g體重Aroclo

7、r1254為建立胚胎著床障礙模型的最適濃度。
　　(2)灌服不同濃度的槲皮素后，隨著槲皮素濃度的升高，懷孕大鼠的胚胎著床率隨之升高，發(fā)育延遲胚和退化變性胚比率呈下降趨勢(shì)。肝臟和子宮中CYP1A1、CYP2B1、CYP2E1的表達(dá)在槲皮素濃度為15 mg/100g體重時(shí)下降最明顯，其它組變化不大。肝臟、子宮及血清中TNF-α、IFN-γ、 IL-2和IL-6的含量下降(P＜0.05)，IL-4的含量呈上升趨勢(shì)(P＜0.05)。肝臟和

8、子宮組織病理學(xué)變化明顯減輕，肝索呈放射狀排列，細(xì)胞的空泡數(shù)量明顯減少，子宮內(nèi)膜上皮完整，內(nèi)膜增厚，腺體數(shù)量增多。子宮中CD4+T細(xì)胞數(shù)量呈下降的趨勢(shì)(P＜0.05)，CD8+T細(xì)胞的數(shù)量增加不明顯，使子宮內(nèi)的免疫平衡向Th2方向偏移。
　　綜上所述，Aroclor1254可損傷大鼠的肝細(xì)胞和子宮內(nèi)膜細(xì)胞，并導(dǎo)致懷孕大鼠的胚胎著床障礙。槲皮素可以明顯拮抗Aroclor1254所致的損傷，使損傷的肝臟得到修復(fù)，子宮的免疫平衡和激素的分