槲皮素對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎的治療作用.pdf

1、目的:
　　通過鋼絲結(jié)扎大鼠雙側(cè)上頜第一磨牙配合高糖高黏飲食建立實(shí)驗(yàn)性牙周炎動(dòng)物模型，槲皮素灌胃治療6周，治療前后牙周組織形態(tài)學(xué)變化及大鼠牙周組織中環(huán)氧化酶-2(COX-2)及金屬基質(zhì)蛋白酶-8(MMP-8)表達(dá)的變化。探討槲皮素對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎的治療作用，為槲皮素治療牙周炎的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)參考。
　　方法:
　　選取50只6月齡健康雌性SD大鼠，體重300g左右。自由攝食、水，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。隨機(jī)抽取1

2、0只，記為正常對(duì)照組(Normal group，Ngroup)，正常喂養(yǎng)，不做處理;6周后10％水合氯醛腹腔注射麻醉，股動(dòng)脈放血處死，取上頜骨標(biāo)本;其余40只分別給予10％水合氯醛麻醉，直徑0.20mm的結(jié)扎絲結(jié)扎大鼠雙側(cè)上頜第一磨牙牙頸部，每天高糖高黏食物喂養(yǎng)，6周后隨機(jī)抽取10只處死，10％水合氯醛腹腔注射麻醉下處死，取上頜骨標(biāo)本，鑒定牙周炎成模，同時(shí)作為牙周結(jié)扎組(Ligation group，group L);其余30只再隨機(jī)分

3、為3組，每組10只，分別為:去結(jié)扎絲組(Removal Ligation group，group R):10％水合氯醛腹腔注射麻醉，去除結(jié)扎絲，正常喂養(yǎng)6周后處死，取上頜骨標(biāo)本;去結(jié)扎絲+槲皮素灌胃組(Removal ligation+ Quercetin group，group RQ):10％水合氯醛腹腔注射麻醉，去除結(jié)扎絲;從第7周開始給予每只大鼠槲皮素灌胃100mg/(kg.d)，6周后處死，取上頜骨標(biāo)本;結(jié)扎+槲皮素灌胃組(Wi

4、th ligation+ Quercetingroup，group WQ):從第7周開始給予每只大鼠槲皮素灌胃100mg/(kg.d)，6周后處死，取上頜骨標(biāo)本，均置于10％甲醛溶液中固定48小時(shí)，然后經(jīng)10％EDTA溶液脫鈣8周，制作牙體牙周組織連續(xù)切片，HE染色光鏡下觀察牙周組織的形態(tài)學(xué)變化，免疫組織化學(xué)染色法觀察各組牙周組織中COX-2、MMP-8的表達(dá)變化，作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理。
　　結(jié)果:
　　1肉眼觀察
　　正

5、常組（N):牙齦乳頭形態(tài)基本完整，無紅腫，探診無出血，未探及牙周袋;
　　牙周結(jié)扎組(L):牙齦紅腫，與牙面分離，有食物殘?jiān)逊e，可探及深牙周袋，個(gè)別大鼠牙周袋內(nèi)有膿性滲出物分泌，探診出血;
　　去結(jié)扎絲組(R):牙齦無紅腫，探診無出血，牙齦乳頭形態(tài)基本完整;
　　去結(jié)扎絲+槲皮素灌胃組(RQ）:牙齦無紅腫，探診無出血，牙齦乳頭形態(tài)基本完整，與正常組無明顯區(qū)別;
　　不去結(jié)扎絲+槲皮素灌胃組(WQ):牙齦無紅腫，

6、探診無出血，與牙周結(jié)扎組相比，牙周袋較淺。
　　2病理學(xué)觀察
　　正常組（N):結(jié)合上皮位于釉牙骨質(zhì)界處，無炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，牙周膜纖維排列有序，牙槽嵴頂未見明顯吸收。
　　牙周結(jié)扎組(L）:結(jié)合上皮離開釉牙骨質(zhì)界，向根方移位形成深牙周袋，周圍有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，牙周膜間隙增寬，牙周膜纖維排列紊亂，周圍毛細(xì)血管擴(kuò)張充血，牙槽骨出現(xiàn)活躍的破骨細(xì)胞性骨吸收陷窩，牙槽嵴頂及固有牙槽骨吸收破壞;
　　去結(jié)扎絲組(R):牙周袋

7、位于釉牙骨質(zhì)界處，牙周袋與牙槽骨之間可見粗大的膠原纖維束增生，其間可見少量慢性炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);牙槽骨內(nèi)可見原有的骨吸收陷窩區(qū)有新的類骨質(zhì)形成。
　　去結(jié)扎絲+槲皮素灌胃組(RQ):結(jié)合上皮位于釉牙骨質(zhì)界處，牙周袋袋壁上皮及結(jié)合上皮周圍幾乎見不到炎癥細(xì)胞，牙槽骨內(nèi)可見少量骨吸收陷窩及破骨細(xì)胞，較多的成骨細(xì)胞，可見新生骨，牙槽嵴頂可見成骨細(xì)胞;
　　不去結(jié)扎絲+槲皮素灌胃組(WQ):牙周袋變淺，溝內(nèi)和袋壁上皮及結(jié)合上皮周圍有少量炎

8、性細(xì)胞浸潤(rùn)，牙周袋與牙槽骨之間可見大量新生的纖維結(jié)締組織，其間可見新生的毛細(xì)血管;牙槽嵴頂可見有新生骨形成;
　　3牙周組織中COX-2及MMP-8的分布及表達(dá)
　　3.1 COX-2在牙周組織中的表達(dá)
　　COX-2在牙周組織中主要表達(dá)在有大量炎癥細(xì)胞聚集的浸潤(rùn)區(qū)，鱗狀上皮、固有層血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞中，陽性染色為棕黃色或黃色顆粒。各組平均光密度值分別為:正常組(N):0.149±0.0042，牙周結(jié)扎組(L):

9、0.181±0.0050，去結(jié)扎絲組(R):0.165±0.0040，去結(jié)扎絲+槲皮素灌胃組(RQ):0.152±0.0021，不去結(jié)扎絲+槲皮素灌胃組(WQ):0.162±0.0039。統(tǒng)計(jì)分析比較如下:
　　3.1.1牙周結(jié)扎組(L):COX-2表達(dá)呈強(qiáng)陽性(+++)，與正常組(N)相比(P＜0.05)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
　　3.1.2去結(jié)扎絲組(R): COX-2表達(dá)呈陽性(++)或弱陽性(+)，與正常組(N)相比(P

10、＜0.05);與牙周結(jié)扎組(L)相比(P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
　　3.1.3去結(jié)扎絲+槲皮素灌胃組(RQ): COX-2表達(dá)呈弱陽性(+)或陰性(-)，與正常組(N)相比(P＞0.05)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與去結(jié)扎絲組(R)相比(P＜0.05)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
　　3.1.4不去結(jié)扎絲+槲皮素灌胃組(WQ): COX-2表達(dá)呈弱陽性(+)，與牙周結(jié)扎組(L)相比(P＜0.05），與去結(jié)扎絲+槲皮素灌胃組相比（P

11、＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.2 MMP-8在牙周組織中的表達(dá)
　　MMP-8在牙周組織中主要表達(dá)在有大量炎癥細(xì)胞聚集的浸潤(rùn)區(qū)、成纖維細(xì)胞、破骨細(xì)胞等細(xì)胞中。陽性染色為棕黃色或黃色顆粒，各組平均光密度值分別為:正常組(N):0.154±0.0032，牙周結(jié)扎組(L):0.203±0.0057，去結(jié)扎絲組(R):0.169±0.0022，去結(jié)扎絲+槲皮素灌胃組(RQ):0.158±0.0022，不去結(jié)扎絲+槲皮素灌

12、胃組(WQ):0.162±0.0046。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果比較如下:
　　3.2.1牙周結(jié)扎組(L): MMP-8表達(dá)呈強(qiáng)陽性（+++），與正常組(N)相比(P＜0.05)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
　　3.2.2去結(jié)扎絲組(R): MMP-8表達(dá)呈陽性(++)或弱陽性(+)，與正常組(N)相比(P＜0.05);與牙周結(jié)扎組(L)相比(P＜0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
　　3.2.3去結(jié)扎絲+槲皮素灌胃組(RQ）:MMP-8表達(dá)呈

13、弱陽性(+)，與正常組(N)相比(P＞0.05），差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與去結(jié)扎絲組(R)相比(P＜0.05）差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
　　3.2.4不去結(jié)扎絲+槲皮素灌胃組(WQ): MMP-8表達(dá)呈弱陽性(+)，與牙周結(jié)扎組(L)相比(P＜0.05)，與去結(jié)扎絲+槲皮素灌胃組(RQ)相比(P＜0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　1鋼絲結(jié)扎大鼠第一磨牙配合高糖高黏飲食成功建立大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎模型;
　　2單純