Coriolus versicolor產(chǎn)漆酶及其在染料脫色中的應(yīng)用.pdf

1、漆酶(E.C.1.10.3.2)是一類含銅的氧化還原酶,它能催化多種芳香族化合物發(fā)生氧化反應(yīng),在生物、化工、醫(yī)藥、環(huán)境等多個(gè)學(xué)科領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用.本文對(duì)Coriolus versicolor漆酶的液體發(fā)酵和固態(tài)發(fā)酵進(jìn)行了研究,并且對(duì)Coriolus versicolor漆酶的酶學(xué)性質(zhì)及其在靛藍(lán)、金橙Ⅱ脫色降解方面的應(yīng)用進(jìn)行了探討,其研究成果如下: 對(duì)Coriolus versicolor漆酶的液體發(fā)酵工藝參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化,結(jié)果表

2、明,以玉米皮為碳源,尿素和硫酸銨為氮源,利用Coriolus versicolor液體發(fā)酵產(chǎn)漆酶時(shí),C/N以20為宜.Coriolus versicolor的適宜培養(yǎng)溫度和pH值分別為30℃和4.5.在搖瓶條件下,發(fā)酵第6天達(dá)到最大值,為4570.8 IU/mL.在發(fā)酵罐條件下,通氣量以0.75 vvm為宜,攪拌速度以300 r/min為宜,Coriolus versicolor產(chǎn)漆酶的活力至144 h達(dá)到最大值4948.4IU/mL.

3、 對(duì)Coriolus versicolor利用玉米秸稈堿處理液中的木質(zhì)素沉淀物產(chǎn)漆酶進(jìn)行了研究,發(fā)現(xiàn)木質(zhì)素沉淀物對(duì)產(chǎn)酶有明顯的促進(jìn)作用.在搖瓶條件下,當(dāng)木質(zhì)素沉淀物用量為6 g/L時(shí),所產(chǎn)漆酶活力為7005.6 IU/ml,而不加木質(zhì)素沉淀物時(shí)的產(chǎn)酶活力僅為1390.1 IU/ml,酶活提高了5.0倍.添加適量的葡萄糖有利于提高漆酶的產(chǎn)量,當(dāng)葡萄糖的含量為10g/L,產(chǎn)酶活力可以達(dá)到7283.6IU/ml.進(jìn)一步對(duì)葡萄糖的添加方

4、式進(jìn)行了研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn)分批加入(初始濃度5 g/L,第3天補(bǔ)加至10g/L)時(shí)的酶活比一次性加入時(shí)的酶活提高了20﹪.在發(fā)酵罐條件下,利用的木質(zhì)素沉淀物產(chǎn)漆酶,酶活力高達(dá)7506.2 IU/ml. 對(duì)Coriolus versicolor漆酶的固態(tài)發(fā)酵進(jìn)行了研究.結(jié)果表明,玉米皮為漆酶固態(tài)發(fā)酵的適宜碳源.以玉米皮為主要碳源、麩皮為主要氮源時(shí),玉米皮和麩皮的適宜比例為6∶4.發(fā)酵培養(yǎng)基的適宜初始含水量為65﹪.適宜接種量為10.0

5、﹪.葡萄糖的適宜添加量是0.5﹪,漆酶活力可達(dá)到75549.5 IU/g.在優(yōu)化條件下,固態(tài)發(fā)酵在第10天酶活達(dá)到最高,為75932.9IU/g,遠(yuǎn)高于國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道值. 對(duì)漆酶的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性進(jìn)行了研究,發(fā)現(xiàn)漆酶酶粉的穩(wěn)定性較酶液有較大提高.在室溫條件下,酶液的半衰期為30天,而酶粉的半衰期為60天,較酶液提高了一倍;4℃條件下,酶液的半衰期為66天,而漆酶酶粉的殘存酶活力在六個(gè)月后仍為83.0﹪.研究了Coriolus vers

6、icolor漆酶的酶學(xué)性質(zhì),以ABTS為底物測(cè)定漆酶活力,發(fā)現(xiàn)漆酶的最適溫度和pH值分別為55℃和4.5,在40℃以下和pH值5～6之間比較穩(wěn)定.利用漆酶脫色降解靛藍(lán)和金橙Ⅱ,試驗(yàn)結(jié)果表明:漆酶降解靛藍(lán)最適pH值為4.5,適宜溫度為30℃,HBT的適宜添加量為2﹪,在3.75 IU/mL漆酶的作用下,420min脫色率可達(dá)到93﹪;漆酶脫色降解金橙Ⅱ的適宜條件為pH4.0,HBT添加量1﹪,30℃下,采用14.0 IU/mL的漆酶處理金