飼料中DON的污染情況調(diào)查及DON制備工藝的研究.pdf

1、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(Deoxynivalenol，DON)，由于該種物質(zhì)會引起豬等動物產(chǎn)生嘔吐癥狀，因此又叫做嘔吐毒素(Vomitoxin)。該種物質(zhì)主要是由鐮刀菌屬的某些真菌產(chǎn)生的有毒次級代謝產(chǎn)物（單端孢霉烯族化合物）中的一種，也是真菌毒素的一種。DON主要的產(chǎn)生菌是禾谷鐮刀菌。1972年DON首次從日本的赤霉病大麥中分離得到，并在同年闡明了這種新的真菌毒素的結(jié)構(gòu)，并將其命名為4-deoxynivalenol。次年，Vesonder等

2、在美國從被鐮刀菌污染的玉米中分離出了同樣的化學(xué)物質(zhì)。在1973年的第三次食品添加劑和污染物會議上，世界衛(wèi)生組織(WHO)和聯(lián)合國糧農(nóng)組織(FAO)將單端孢霉烯族真菌毒素定位最危險的自然發(fā)生食品污染物，而其中DON污染糧食最為普遍，嚴重危害人畜安全。1976年，我國從上海金山縣赤霉病小麥中也分離出能導(dǎo)致鴿子嘔吐的DON。近年來，飼料中DON的檢出率居高不下，對畜牧業(yè)造成很大的負面影響。此外，相關(guān)研究顯示DON可能與食道癌和大骨節(jié)病的發(fā)病率

3、有密切關(guān)系。因而，對于DON的一系列研究已經(jīng)被很多國家所重視。
　　本論文主要研究2012-2013年國內(nèi)飼料中DON的污染情況以及DON的制備工藝。DON的污染情況可以為今后生產(chǎn)實踐中制定有針對性的防控措施提供理論依據(jù)，而DON純化工藝的研究可以為以后DON的毒理研究提供原材料。
　　試驗一：2012-2013年國內(nèi)飼料中DON的污染情況調(diào)查
　　本試驗利用HPLC方法對199份飼料及原料進行了DON含量的檢測，并對

4、檢測結(jié)果進行數(shù)據(jù)分析。DON的總檢出率為87.44％，超標(biāo)率為27.14％。從地區(qū)分析，華中地區(qū)的DON污染情況最嚴重;從時間分析，相比較2012年DON污染情況，2013年相對好轉(zhuǎn);從樣品類別分析，全價料的檢出率要高于原料，而超標(biāo)率則比原料的低，而且全價料中豬料的污染情況要比雞料的污染情況嚴重。
　　試驗二：禾谷鐮刀菌產(chǎn)DON條件的優(yōu)化
　　本次優(yōu)化首先對產(chǎn)毒培養(yǎng)基進行單因素試驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在玉米中的產(chǎn)毒量要明顯高于小麥和大

5、米。然后以玉米作為產(chǎn)毒培養(yǎng)基，用Plackett-Burman(PB)試驗設(shè)計對影響禾谷鐮刀菌產(chǎn)DON的變量（水分含量、溫度、時間、接種孢子濃度和培養(yǎng)基的量）進行關(guān)鍵因子篩選，PB試驗結(jié)果顯示，就DON的產(chǎn)量而言，該模型顯著（P＜0.0001），R2為0.9869，最終的結(jié)果顯示水分含量(P＜0.0001)、溫度(P=0.025)、時間(P=0.0038)是影響DON產(chǎn)量的關(guān)鍵因子。最終的優(yōu)化結(jié)果是，該株菌在水分含量為32.5％的時候，

6、置于27℃培養(yǎng)25 d后，DON的最高產(chǎn)量達到61.82 mg/kg，比單因素試驗時候的最高產(chǎn)量高26.45％。
　　試驗三：DON純品的制備工藝研究
　　本試驗采用硅膠柱層析方法來進行DON的分離純化。先利用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和甲醇進行初步的分離，發(fā)現(xiàn)只有乙酸乙酯中含有DON;再對乙酸乙酯部分進行DON的分離純化，選擇二氯甲烷-甲醇(17∶1，V/V)作為洗脫劑，最后將含有DON的部分合并濃縮，并置于4℃得到結(jié)晶2