紫外線B照射的供體脾細(xì)胞預(yù)輸注對(duì)異體神經(jīng)移植影響的研究.pdf

1、背景和目的：長(zhǎng)期以來(lái)，周?chē)窠?jīng)損傷的修復(fù)對(duì)于骨科醫(yī)務(wù)工作者都是一個(gè)難題。臨床上，用于治療周?chē)窠?jīng)損傷尤其是長(zhǎng)段損傷或缺損的方法中，自體神經(jīng)移植術(shù)仍是最可靠的治療手段，但是供區(qū)神經(jīng)功能損失及可供縫合神經(jīng)長(zhǎng)度及直徑有限是不可克服的缺點(diǎn)。硅膠管等各種合成材料和自體骨骼肌、靜脈等生物源性材料可引導(dǎo)神經(jīng)再生，但其結(jié)構(gòu)與神經(jīng)基底膜不同，軸突再生欠佳，臨床應(yīng)用價(jià)值不大，同種異體神經(jīng)移植可克服上述缺點(diǎn)，但存在排斥反應(yīng)問(wèn)題。 本研究旨在：通過(guò)尾靜

2、脈預(yù)輸注經(jīng)紫外線照射的供體脾細(xì)胞及同種異體坐骨神經(jīng)移植后，測(cè)定大鼠外周血T淋巴細(xì)胞亞群，探討周?chē)窠?jīng)缺損修復(fù)的可行性。為修復(fù)周?chē)窠?jīng)缺損提供一種新的方法。 研究方法： 選用成年雄性供體SD大鼠，消毒后無(wú)菌摘取脾臟，即制成單細(xì)胞懸液。用中波紫外線熒光燈照射，強(qiáng)度劑量為12000 J/m2，用0.2％臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)細(xì)胞活率大于95％。以尾靜脈方式給予Wister受體鼠，總量2.5×107個(gè)細(xì)胞的供體SD鼠脾細(xì)胞。根據(jù)周?chē)窠?jīng)

3、移植方法的不同，將Wister大鼠隨機(jī)分為3組，每組10只：Ⅰ組為自體神經(jīng)移植組、Ⅱ組為異體神經(jīng)移植組、Ⅲ組為尾靜脈預(yù)輸注經(jīng)紫外線照射的供體脾細(xì)胞異體神經(jīng)移植組，橋接wistar大鼠坐骨神經(jīng)1.0cm的缺損。7天后移植供體鼠坐骨神經(jīng)。術(shù)后7、14天免疫學(xué)檢查外周血T淋巴細(xì)胞亞群，術(shù)后8周、12周進(jìn)行小腿三頭肌濕重、神經(jīng)電生理學(xué)、電鏡組織學(xué)檢測(cè)。 結(jié)果： 術(shù)后7、14天免疫學(xué)檢查示，應(yīng)用單因素方差分析對(duì)三組進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

4、結(jié)果顯示：坐骨神經(jīng)移植術(shù)后7天，外周血T淋巴細(xì)胞亞群檢查中，Ⅲ組較Ⅱ組的CD8T淋巴細(xì)胞的百分率高、CD4T淋巴細(xì)胞的百分率低、CD4/CD8比值大，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。Ⅰ組與Ⅲ組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。坐骨神經(jīng)移植術(shù)后14天，外周血T淋巴細(xì)胞亞群檢查中，Ⅲ組較Ⅱ組的CD8細(xì)胞的百分率增加、CD4細(xì)胞的百分率減少、CD4/CD8比值變小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。這表明尾靜脈預(yù)輸注經(jīng)紫外線照射的供體脾細(xì)

5、胞減弱了近期內(nèi)(2周內(nèi))的特異性免疫反應(yīng)。術(shù)后8周，小腿三頭肌濕重、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度，Ⅲ組優(yōu)于Ⅱ組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，Ⅰ組和Ⅲ組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。術(shù)后12周，小腿三頭肌濕重、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度，Ⅲ組優(yōu)于Ⅱ組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，Ⅰ組和Ⅲ組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。術(shù)后12周，透射電鏡觀察結(jié)果顯示：Ⅰ組可見(jiàn)神經(jīng)纖維內(nèi)有大量再生的髓鞘及軸突，許旺細(xì)胞功能活躍，新生軸突內(nèi)微絲密集排列，線粒體

6、較大，軸膜清晰可見(jiàn)，有髓神經(jīng)纖維較粗，髓鞘厚，板層清晰可見(jiàn)，雪旺氏細(xì)胞增生明顯。Ⅱ組可見(jiàn)大部分神經(jīng)纖維脫髓鞘崩解，軸突消失，未見(jiàn)再生的神經(jīng)纖維。Ⅲ組可見(jiàn)大量的再生神經(jīng)纖維，軸突內(nèi)微絲密集排列，線粒體嵴電子密度增高，雪旺氏細(xì)胞包繞再生軸突形成有髓神經(jīng)纖維，神經(jīng)纖維排列規(guī)則緊密，結(jié)締組織少。 結(jié)論： 尾靜脈內(nèi)注射去抗原的異基因脾細(xì)胞經(jīng)抗原呈遞細(xì)胞(主要是樹(shù)突狀細(xì)胞)處理呈遞，誘發(fā)免疫耐受的發(fā)生。外周靜脈耐受是導(dǎo)致機(jī)體免疫耐受