非小細(xì)胞肺癌患者外周血中兩群髓源抑制性細(xì)胞的特性及臨床意義.pdf

1、背景和目的
　　肺癌是最常見的惡性腫瘤，手術(shù)聯(lián)合化療是目前治療肺癌的標(biāo)準(zhǔn)手段，但絕大多數(shù)肺癌患者確診時(shí)已失去手術(shù)機(jī)會(huì)，一部分即使進(jìn)行手術(shù)仍存在較高的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移率。發(fā)展更為有效的肺癌輔助治療措施已經(jīng)迫在眉睫。近年，腫瘤生物免疫治療逐漸出現(xiàn)在臨床應(yīng)用中，早期的腫瘤生物治療策略主要集中在正向提高腫瘤患者的抗腫瘤免疫功能。但近來許多研究提示腫瘤患者體內(nèi)存在免疫抑制和免疫逃逸是影響生物免疫治療療效的主要原因。隨著對(duì)腫瘤免疫和腫瘤微環(huán)境研究的

2、深入，造成腫瘤患者免疫抑制狀態(tài)的因素也日益明晰。髓源抑制性細(xì)胞(MDSCs)在多種腫瘤患者外周血和腫瘤組織中的比例顯著高于正常人，是參與免疫抑制和免疫逃逸從而影響抗腫瘤效果的主要因素之一。
　　目前已有許多關(guān)于MDSCs表型和功能的研究，根據(jù)表面標(biāo)記物的不同MDSCs被區(qū)分為單核系和粒系，并發(fā)現(xiàn)不同類型的惡性腫瘤其MDSCs的表型和數(shù)量分布其實(shí)存在差異。Han-Pin，Kuo研究組采用CD14和CD11b作為表型標(biāo)志，將MDSCs

3、分為CD14+CD11b+cell(M-MDSC)和CD14-CD11+cell(G-MDSC)兩群。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)MDSCs在多種惡性腫瘤中異常聚積，并與腫瘤患者的預(yù)后相關(guān)。但關(guān)于非小細(xì)胞肺癌中兩群MDSCs的研究仍是有限的，我們參照Han-Pin，Kuo研究組的分群方式分析非小細(xì)胞肺癌中兩群MDSCs的差異及與臨床參數(shù)及化療的相關(guān)性，并進(jìn)一步分析它們的作用機(jī)制，為肺癌免疫治療尋找新靶點(diǎn)。
　　方法
　　收集非小細(xì)胞肺癌患者化療

4、前后和健康人外周血6ml，采用密度梯度離心法獲得單個(gè)核細(xì)胞，采用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)外周血中CD14+CD11b+cell(M-MDSC)和CD14-CD11b+cell(G-MDSC)水平及CD4+和CD8+T細(xì)胞表面Tim3、PD-1和CTLA-4的表達(dá);并采用磁分選和流式分選提純M-MDSC和G-MDSC，繼而通過real-timePCR分析兩群細(xì)胞ARG1、HIF-1α、COX-2和IL-10等抑制性分子的表達(dá)水平;兩群MD

5、SCs與CD8+T細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)，檢測(cè)T細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的增殖和凋亡;連續(xù)檢測(cè)每周期化療后患者外周血中G-MDSC和M-MDSC的比例。
　　結(jié)果
　　1.非小細(xì)胞肺癌患者外周血G-MDSC比例較M-MDSC高(P=0.031)，健康人中G-MDSC低于M-MDSC(P=0.023)。與健康人相比，患者G-MDSC明顯升高(P＜0.001)，但M-MDSC比例無顯著差異。
　　2.與健康人相比，非小細(xì)胞肺癌患者G-

6、MDSC高表達(dá)ARG1、HIF-1α和IL-10，M-MDSC高表達(dá)COX-2和IL-10(P＜0.05);患者G-MDSC上ARG1水平高于M-MDSC，COX-2水平低于M-MDSC(P＜0.05)。
　　3.非小細(xì)胞肺癌患者G-MDSC和M-MDSC抑制CD8+T細(xì)胞增殖的能力顯著高于健康人(P＜0.05)，其抑制作用隨MDSCs比例的升高而增加。
　　4.G-MDSC和M-MDSC有效減輕化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用

7、(P＜0.001)，并促進(jìn)其增殖（P＜0.05）。
　　5.隨化療周期進(jìn)行，SD組與PR組的G-MDSC比例顯著降低(P＜0.05)，而PD組無明顯變化;不同療效組間，M-MDSC變化無明顯差異。且化療周期結(jié)束后，PR組G-MDSC比例明顯低于SD組/PD組(F=7.353，P=0.004)。
　　6.第1周期化療前，外周血中G-MDSC比例高的非小細(xì)胞肺癌患者療效較差（x2=4.180,P=0.041）。
　　結(jié)論<