非小細(xì)胞肺癌患者外周血中CD4+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞各亞群特性及臨床意義.pdf

1、背景和目的：
　　肺癌是全世界癌癥相關(guān)死亡的首要原因，嚴(yán)重威脅著人類的生命質(zhì)量和健康水平。其中非小細(xì)胞肺癌約占80％。雖然近年來治療方法有所提高，但肺癌患者總體5年生存率仍不理想。由于其發(fā)病率高，治療效果有限，五年生存率低，因此人們迫切需要尋找新的治療方式。近年來研究發(fā)現(xiàn)肺癌的發(fā)生是一個(gè)多因素、多基因相互作用的過程。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，免疫系統(tǒng)在癌癥發(fā)生、發(fā)展過程中所起的作用越來越被人們所重視。有研究提示惡性腫瘤患者的免

2、疫系統(tǒng)在腫瘤局部和全身都處于耐受或缺陷狀態(tài)，腫瘤只有在逃逸機(jī)體的免疫機(jī)制之后才能得以繼續(xù)進(jìn)展。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cell，Treg)作為一類具有獨(dú)特免疫調(diào)節(jié)功能的細(xì)胞亞群在腫瘤的免疫逃逸過程中發(fā)揮著重要作用。
　　到目前為止已有多種Treg表面標(biāo)記物被報(bào)道，如叉頭狀/翅膀狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子(Foxp3)，CD127，CD39，Toll樣受體，細(xì)胞程序性死亡分子(PD-1)，細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4(CTLA-4

3、)，糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的腫瘤壞死因子受體(GITR)等，其中最具特異性的標(biāo)志是Foxp3。然而近年來有研究表明，人類CD4+Foxp3+T細(xì)胞亞群為非均一性細(xì)胞群，即有些細(xì)胞雖表達(dá)Foxp3但不具有免疫抑制功能。Miyara研究組采用CD4、CD25、CD45RA和Foxp3作為表型標(biāo)志，將人CD4+Foxp3+T細(xì)胞分成rTreg、non-Treg、aTreg三群具有不同表型和功能的亞群。目前已在多種腫瘤中發(fā)現(xiàn)Treg的異常聚集，并發(fā)現(xiàn)T

4、reg水平與部分腫瘤患者的預(yù)后有關(guān)，但關(guān)于rTreg、non-Treg、aTreg與非小細(xì)胞肺癌關(guān)系的研究還相當(dāng)匱乏。因此本實(shí)驗(yàn)中，我們參考Miyara研究組中定義Treg的標(biāo)志，分析非小細(xì)胞肺癌患者和健康對照組外周血中這三群Treg細(xì)胞間的差異，以及與臨床參數(shù)之間的相關(guān)性和化療前后的變化，并進(jìn)一步分析驗(yàn)證其特性，從而了解哪群Treg在肺癌患者的免疫抑制中發(fā)揮主要作用，以期為非小細(xì)胞肺癌的臨床治療提供新的靶點(diǎn)。
　　方法：

5、　　采集非小細(xì)胞肺癌患者化療前后及健康人外周血6ml，通過密度梯度離心法獲得單個(gè)核細(xì)胞，采用流式細(xì)胞術(shù)分析外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg、rTreg、non-Treg、aTreg水平及rTreg、non-Treg、aTreg三群表面抑制性分子CD39，細(xì)胞因子IFN-γ、TGF-β分泌情況;并采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)分析非小細(xì)胞肺癌患者及健康對照組血漿中TGF-β1水平。
　　結(jié)果：
　　1.non

6、-Treg表面表達(dá)較低水平的抑制性分子CD39并分泌較高水平的IFN-γ及較低水平的TGF-β;rTreg、aTreg可表達(dá)較高水平的CD39，并分泌少量IFN-γ及較高水平的TGF-β。
　　2.與健康對照組相比，非小細(xì)胞肺癌組外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg比例及其相關(guān)細(xì)胞因子TGF-β1顯著增高（p＜0.01）。但是通過亞群進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn):肺癌患者與健康對照組相比三群Treg中僅aTreg水平明顯增高，差異具有統(tǒng)

7、計(jì)學(xué)意義(p=0.001)，而rTreg及non-Treg在兩組中無明顯差異。
　　3.肺腺癌與鱗癌患者之間CD4+Foxp3+T細(xì)胞各亞群之間無差異;Ⅲ-Ⅳ期非小細(xì)胞肺癌患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg及aTreg比例明顯高于Ⅰ-Ⅱ期患者。
　　4.非小細(xì)胞肺癌患者接受有效的化療后，外周血中三群Treg水平均降低，其中non-Treg下降明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.024);rTreg及aTreg有下降

8、趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p值分別為0.063，0.23)。
　　結(jié)論：
　　1.CD4+Foxp3+T細(xì)胞亞群為非均一性細(xì)胞群。
　　2.非小細(xì)胞肺癌患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg水平及相關(guān)細(xì)胞因子TGF-β1水平顯著增高，提示非小細(xì)胞肺癌患者處于免疫抑制狀態(tài)。
　　3.非小細(xì)胞肺癌患者外周血中CD4+Foxp3+T細(xì)胞各亞群與病理類型無關(guān)，CD4+CD25+Foxp3+Treg及aTreg隨T