濾泡性輔助T細(xì)胞及濾泡性調(diào)節(jié)T細(xì)胞在結(jié)直腸癌患者外周血中的表達(dá)及其臨床意義.pdf

1、背景:結(jié)直腸癌是全世界發(fā)病率排名第三的惡性腫瘤，每年有超過(guò)100萬(wàn)患者確診為結(jié)直腸癌。傳統(tǒng)治療手段（手術(shù)，化療，放療，靶向治療）療效不理想。除了腫瘤本身的機(jī)制外，腫瘤微環(huán)境特別是炎癥反應(yīng)、免疫反應(yīng)與腫瘤的進(jìn)展甚至放化療、靶向藥物抵抗有關(guān)?？梢哉f(shuō)，腫瘤免疫治療的時(shí)代已經(jīng)到來(lái)。事實(shí)上越來(lái)越多的證據(jù)表明，在預(yù)防腫瘤的發(fā)生、生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移擴(kuò)散中免疫系統(tǒng)扮演重要的角色。
　　對(duì)于CD4+T淋巴細(xì)胞亞群的研究是近年來(lái)免疫學(xué)研究的一個(gè)熱點(diǎn)。Tfh作

2、為CD4+T淋巴細(xì)胞亞群的一種，是近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)的一種特殊的輔助性T細(xì)胞，表達(dá)CXCR5的Tfh細(xì)胞在CXCL13的趨化下，被募集到淋巴濾泡，參與誘導(dǎo)B細(xì)胞的分化及生發(fā)中心的形成，通過(guò)產(chǎn)生IL-21等細(xì)胞因子以及表達(dá)ICOS等粘附分子來(lái)調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能。而Tfr細(xì)胞作為T(mén)fh細(xì)胞的調(diào)節(jié)對(duì)應(yīng)物，兼有Tfh和Foxp3+ Treg細(xì)胞的表型特征，抑制生發(fā)中心的形成及B細(xì)胞的分化，充當(dāng)與Tfh相反的角色。近來(lái)研究表明失調(diào)的免疫系統(tǒng)在乳腺癌、

3、非小細(xì)胞肺癌和肉瘤的發(fā)生中扮演重要的作用。而關(guān)于Tfh和Tfr在結(jié)直腸癌患者中表達(dá)的研究，國(guó)內(nèi)外尚少有報(bào)道。本研究分別采用流式細(xì)胞術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)直腸癌患者和健康人外周血Tfh、Tfr的表達(dá)和上清IL-21的含量，并分析其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系，探討其在結(jié)直腸癌中表達(dá)的意義。
　　目的:檢測(cè)Tfh和Tfr在結(jié)直腸癌患者和健康對(duì)照組人外周血表達(dá)水平，同時(shí)測(cè)定外周血上清IL-21含量。分析Tfh和Tfr與臨床病理參數(shù)的關(guān)系，探

4、討其在結(jié)直腸癌中表達(dá)的意義。
　　方法:
　　1、通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組結(jié)直腸癌患者和健康對(duì)照組人外周血中CD4+CXCR5+PD-1+Foxp3-Tfh細(xì)胞和CD4+CXCR5+PD-1+Foxp3+Tfr細(xì)胞的表達(dá)。
　　2、用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法，在分子水平檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組結(jié)直腸癌患者和健康對(duì)照組人外周血上清IL-21含量。
　　結(jié)果:
　　1、研究對(duì)象的一般信息和臨床特點(diǎn)
　　實(shí)驗(yàn)組

5、結(jié)直腸癌患者共62例，男性34例，女性28例，年齡范圍23～83歲，平均年齡57.6歲，中位年齡58.5歲，病理均證實(shí)為腺癌。TNM分期:Ⅰ期7例，Ⅱ期21例，Ⅲ期25例，Ⅳ期9例（肝轉(zhuǎn)移4例，肺轉(zhuǎn)移3例，腹腔廣泛轉(zhuǎn)移1例，腦轉(zhuǎn)移1例），其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及部分Ⅳ期(4例肝轉(zhuǎn)移)患者均行手術(shù)治療。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的32例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的30例。健康對(duì)照組共30例，男性6例，女性24例，年齡范圍26～78歲，平均年齡53.2歲，中位年齡54歲。實(shí)

6、驗(yàn)組與健康對(duì)照組在年齡、性別、吸煙狀態(tài)等方面相比沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　2、實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組外周血中Tfh細(xì)胞和Tfr細(xì)胞的表達(dá)
　　以CD4+CXCR5+PD-1+Foxp3-作為T(mén)fh細(xì)胞的標(biāo)記，CD4+CXCR5+PD-1+Foxp3+作為T(mén)fr細(xì)胞的標(biāo)記。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組結(jié)直腸癌患者和對(duì)照組健康人外周血中Tfh細(xì)胞和Tfr細(xì)胞的表達(dá)。P1門(mén)為外周血淋巴細(xì)胞，設(shè)CD4+T細(xì)胞為2門(mén)，Q3和Q4分別為外周血中Tfh細(xì)

7、胞和Tfr細(xì)胞的表達(dá)情況。
　　3、實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組人外周血Tfh細(xì)胞和Tfr細(xì)胞的表達(dá)
　　實(shí)驗(yàn)組CRC患者外周血Tfh細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的百分比高于健康對(duì)照組（2.93±2.48vs2.09±1.34，P=0.038）;而實(shí)驗(yàn)組CRC患者外周血Tfr細(xì)胞低于健康對(duì)照組（0.16±0.09vs0.2±0.11，P=0.047）。
　　4、結(jié)直腸癌患者外周血Tfh細(xì)胞與臨床病理參數(shù)的關(guān)系
　　有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者Tfh

8、細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞百分比較無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者高(2.85±1.5 vs2.20±1.2)。各TNM分期間Tfh細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞百分比相比較，Ⅰ期(1.39±0.64)和Ⅳ期(1.97±0.82)相比較，P=0.04，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;而Ⅰ期和Ⅱ期、Ⅲ期相比較及Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期間相互比較P值均大于0.05，沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。比較CRC患者CEA＞5ng/ml和CEA＜5ng/ml兩組間Tfh細(xì)胞表達(dá)（3.06±2.79vs2.19±2.16，

9、P=0.173），無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　5、酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組結(jié)直腸癌患者和健康對(duì)照組外周血上清IL-21水平，結(jié)果顯示:實(shí)驗(yàn)組結(jié)直腸癌患者血清IL-21水平高于健康對(duì)照組（196.48±69.85vs149.85±91.49，P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1、結(jié)直腸癌患者外周血中Tfh細(xì)胞表達(dá)量升高，同時(shí)伴有Tfr表達(dá)量下降，且外周血上清IL-21水平升高。
　　2、Tfh、Tfr細(xì)胞可能參與了結(jié)直腸