脆性X綜合征的篩查、診斷和社會適應(yīng)能力及Fmr1基因敲除小鼠的神經(jīng)機制研究.pdf

1、脆性X綜合征(Fragile X mental retardation Syndrome，F(xiàn)XS)是一種常見的遺傳性精神發(fā)育遲滯性疾病，其發(fā)病率高達1/4000。絕大多數(shù)的FXS是由于X染色體FMR1(fragile X mental retardation-1)基因(CGG)n重復序列過度擴展導致基因甲基化而引起的。男性患者臨床表現(xiàn)較女性患者嚴重，主要表現(xiàn)為中、重度的精神發(fā)育遲滯，伴特殊面容，如長臉、大或招風耳，青春期以后出現(xiàn)大睪丸，

2、許多患者還表現(xiàn)為多動、沖動、焦慮、社交退縮、刻板語言等孤獨癥樣行為。早期發(fā)現(xiàn)、早期治療和干預，可以顯著改善患兒預后，并為家系成員提供遺傳咨詢，避免家族中再次出現(xiàn)同樣患者，具有不可估量的社會效益和經(jīng)濟效益。
　　本研究應(yīng)用雙重實時熒光定量PCR技術(shù)，即普通實時熒光定量PCR聯(lián)合甲基化敏感性限制性內(nèi)切酶定量PCR(methylation-sensitive restriction enzymes-basedquantitative P

3、CR，MSRE-QPCR)技術(shù)，進行FXS患者FMR1基因(CGG)n序列和CpG島甲基化程度的定量檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該技術(shù)對男性患者的診斷效率極高，既可以診斷全突變男性，也可以辨別男性全突變/前突變嵌合體，與Southern blot相當；對女性全突變患者的甲基化分辨率也較高，可以作出診斷，但對于女性全突變和全突變/前突變嵌合體的分辨率欠佳。該技術(shù)自動化程度高，重復性好，快速經(jīng)濟，需要DNA量少，可以進行高通量的大樣本檢測，因此，我們建

4、議可以將其推廣用于脆性X綜合征(尤其是男性患者)的分子生物學診斷和人群篩查。
　　目前，關(guān)于我國脆性x綜合征兒童臨床特征和社會適應(yīng)能力的研究尚屬空白。本研究通過臨床檢查表和社會適應(yīng)能力量表對FXS男童進行評估，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，六項簡易臨床檢查表≥5分的切值更適合我國FXS男童的早期篩查，該切值既可以早期發(fā)現(xiàn)可能患FXS的男童，對其進行分子生物學診斷，提高了FXS的檢出率，又可以使61.6％的可疑患兒避免進行脆性X綜合征的實驗室診斷，大大

5、減少了診斷成本，而不會漏診任何患兒。對確診兒童的評估發(fā)現(xiàn)，中國FXS男童的注意缺陷/多動障礙(attention deficiency hyperactivity disorder，ADHD)的發(fā)生率明顯高于其他國家的報道，可能與我們的患兒未積極進行藥物治療有關(guān)。同時，研究還發(fā)現(xiàn)，我國脆性X綜合征男童的社會適應(yīng)能力較差，明顯落后于同年齡的正常兒童，與同智齡正常兒童和同智齡同年齡的唐氏綜合征(Down syndrome，DS)兒童相仿，但

6、是，各個維度發(fā)展不均衡，作業(yè)操作、參加集體活動和自我管理能力甚至落后于DS兒童。因此，要改善我國FXS兒童的臨床癥狀和生活質(zhì)量，需要加強早期診斷和積極治療，以及針對患兒臨床特征的特殊訓練和教育。
　　脆性X綜合征動物模型的應(yīng)用，為神經(jīng)病理學機制的研究提供了條件，進而促進了針對神經(jīng)機制的靶向藥物治療的發(fā)展。本研究通過實時熒光定量RT-PCR和免疫組化、Western blot實驗方法，對Fmr1基因敲除(knockout，KO)小鼠

7、三個主要腦區(qū)(大腦皮層、海馬和小腦)突觸后致密物蛋白95(postsynaptic density protein95，PSD-95)mRNA及其蛋白質(zhì)時空表達的改變進行了探索。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在這三個主要腦區(qū)中，PSD-95 mRNA及其蛋白質(zhì)的表達在生后第7天(P7)最低，14天明顯上升，在青春期或成年期達到高峰。與野生型對照組小鼠相比，F(xiàn)mr1 KO小鼠不管在生長發(fā)育期(P7、P14、P21、P28)還是成年期(P90)，海馬部位PSD