水體中微囊藻毒素的高靈敏快速免疫檢測技術(shù)的研究.pdf

1、采用膠體金免疫層析技術(shù)(CGICA)和酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)(ELISA)，建立了微囊藻毒素(MC-LR)的高靈敏快速檢測方法，并研制出具有我國自主知識產(chǎn)權(quán)的高靈敏度酶免檢測試劑盒和快速“金標(biāo)”檢測試紙條。 在研究中采用“活潑酯法”和“碳二亞胺法”，分別制備了MC-LR-KLH免疫抗原和MC-LR-BSA檢測抗原。按常規(guī)方法免疫新西蘭大白兔20周，經(jīng)采血，飽和硫酸胺沉淀純化得到抗MC-LR的多克隆抗體。同時(shí)，免疫Balb/c小鼠，用細(xì)

2、胞融合和雜交瘤技術(shù)篩選，獲得了高特異分泌抗MC-LR單克隆細(xì)胞株，經(jīng)小鼠體內(nèi)擴(kuò)大培養(yǎng)，純化后獲得抗MC-LR的單克隆抗體。利用制備的多克隆抗體， MC-LR-BSA檢測抗原，以及相應(yīng)的ELISA常規(guī)試劑，建立了MC-LR的間接競爭ELISA方法，對方法的靈敏度，線性范圍，特異性，重現(xiàn)性，誤差影響因素等主要技術(shù)指標(biāo)進(jìn)行了考核，同時(shí)研制出了相應(yīng)的檢測試劑盒，考核其穩(wěn)定性和回收率，并與相關(guān)的其他檢測方法及國內(nèi)外同類試劑盒進(jìn)行了比對驗(yàn)證。利用制

3、備的抗MC-LR單克隆抗體，MC-LR-BSA檢測抗原以及相應(yīng)的CGICT常規(guī)試劑和輔材，建立了。MC-LR的膠體金免疫層析快速檢測方法，對方法的靈敏度，特異性，重現(xiàn)性，檢測時(shí)間，誤差影響因素等主要技術(shù)指標(biāo)進(jìn)行了考核，同時(shí)研制出了相應(yīng)的“金標(biāo)”快速檢測試紙條，考核其穩(wěn)定性和回收率。用HPLC法對其進(jìn)行了比對驗(yàn)證。 利用多克隆抗體建立的MC-LR間接競爭ELlSA法和研制的酶免檢測試劑盒，其靈敏度為0.05μg/L，檢測線范圍為0

4、.1μg/L～10μg/L，擬合線性方程為Y=-202355x-0.4119，相關(guān)系數(shù)R<'2>=0.9987， IC<,50>為0.65μg/L，與MC-RR交叉反應(yīng)率<30％，與MC-LW，MC-LF的交叉反應(yīng)率均<1％，重現(xiàn)性為0.86～7.21％，平均3.96％，檢測時(shí)間<2.5h，有效期大于6個(gè)月，樣品檢測回收率為79.8～117.8％，平均為93.25％，與進(jìn)口和國內(nèi)同類試劑盒的比對實(shí)驗(yàn)結(jié)果，P>0.05，無明顯差異，與HP