芽變新品系‘川早枇杷’的生物學(xué)特性及核型和ISSR鑒定研究.pdf

1、‘川早枇杷’是由福建引進的枇杷品種‘早鐘六號’的芽變新品系，2008年發(fā)現(xiàn)于四川省雅安市漢源縣，表現(xiàn)“特早熟”，且其果實品質(zhì)優(yōu)于‘早鐘6號’。在實際的芽變選種中，發(fā)現(xiàn)和分析變異，其關(guān)鍵是確定芽變?yōu)檫z傳變異還是環(huán)境引起的飾變。為此，本研究采用生物學(xué)特性調(diào)查、染色體核型分析和ISSR分子標(biāo)記相結(jié)合的方法從形態(tài)、細胞、分子三個層面對‘川早枇杷’進行鑒定，旨在判斷ISSR分子標(biāo)記對枇杷芽變鑒定的可行性，并對‘川早枇杷’所表現(xiàn)出的“特早熟”性狀是

2、遺傳變異還是在特定環(huán)境下的生態(tài)反應(yīng)做出結(jié)論，主要研究結(jié)果如下:
　　1、‘川早枇杷’樹姿較直立，嫩梢綠色，密被茸毛，單果重45g-80g，果皮橙黃色，顏色均勻，果肉橙紅色，細膩化渣，汁多味甜。‘川早枇杷’的枝梢生長在四川漢源從1月中旬開始，至12月中旬結(jié)束，一年抽梢4次，全年基本無休眠;第一批花于7月中旬開放，第二批和第三批花分別于8月底和10月底開放，三批花開花持續(xù)時間長達5個月，每批花從始花期到終花期持續(xù)約1個半月左右;第一批

3、果實于11月底開始著色，至1月下旬大部分達到采收標(biāo)準(zhǔn)，第二批果實成熟時間為1月下旬至4月上旬，第三批果實則在4月中旬達到采收標(biāo)準(zhǔn)。
　　2、‘川早枇杷’與‘大五星’和‘早鐘6號’的染色體數(shù)目均為2n=34，核型公式為2n=34=18m+16sm，包含18條中部著絲粒染色體和16條近中部著絲粒染色體。‘川早枇把’最長和最短臂比值為1.74，平均臂比值1.87，與‘大五星’之間存在顯著差異，而與‘早鐘6號’間無顯著差異。
　　3

4、、采用L25(5(5))正交設(shè)計對ISSR-PCR反應(yīng)體系進行優(yōu)化，建立適用于‘川早枇杷’的ISSR反應(yīng)體系。通過對實驗結(jié)果評分和分析，獲得‘川早枇杷’最優(yōu)ISSR反應(yīng)體系為:25μl體系，其中dNTPs0.25mmol/l，Mg2+1.5mmol/l，引物0.5μmol/l，Taq酶2.5U/μl，模板DNA40ng/25μl，10×PCR-buffer2.5μl。
　　4、從100條ISSR引物中篩選出14條進行擴增，共獲得1

5、65條帶，平均每條引物擴增出11.8條帶，其中多態(tài)性條帶108條，多態(tài)性百分率為65.45％。引物UBC895擴增出17條多態(tài)性條帶，多態(tài)性百分率達到100％。14條ISSR引物在‘川早枇杷’和‘早鐘6號’中擴增出84條帶，在‘日本茂木’和‘川早枇杷’中擴增出122條，多態(tài)性比例分別為0.1071和0.1967。
　　5、通過對13個枇杷品種（品系）進行ISSR分析，遺傳相似系數(shù)為0.6184-0.8244。同其他12個品種（品系

6、）的遺傳相似系數(shù)相比，‘川早枇杷’與‘日本茂木’的遺傳相似系數(shù)最高，為0.7920，‘早鐘六號’和‘晚鐘’與‘川早枇杷’的遺傳相似系數(shù)分別為0.7717和0.7444。‘大五星’與‘川早枇杷’的遺傳相似系數(shù)最低，僅為0.6525。利用NTSYSpc軟件，采用非加權(quán)配對算術(shù)平均法(Unweighted pair-group method arithmetic means，UPGMA)構(gòu)建了13個枇杷品種（品系）的親緣關(guān)系樹狀聚類圖，在遺傳