番茄乙烯信號轉(zhuǎn)導組分EIN3互作蛋白LeEBFs的基因克隆和功能研究.pdf

1、乙烯作為植物激素，在植物生長發(fā)育過程中起著重要的調(diào)節(jié)作用。乙烯對植物生長發(fā)育過程的影響包括：種子萌發(fā)、對莖和根伸長的抑制、開花、衰老和脫落、性別分化、果實成熟、脅迫反應等。目前，乙烯信號轉(zhuǎn)導途徑及其調(diào)控機理已成為植物分子生物學的研究熱點。Potuschak和Guo等同時在擬南芥中發(fā)現(xiàn)了兩個能與 EIN3相互作用的F結(jié)構(gòu)域蛋白，EBF1和EBF2蛋白（EIN3-binding F- box protein）。EBF1的過量表達使植物對乙烯

2、不敏感。相反，帶有EBF1和EBF2雙突變體的efb1/efb2植株在沒有乙烯的情況下卻能產(chǎn)生乙烯組成性的反應，并有EIN3蛋白的積累，表明乙烯反應依賴于EIN3蛋白的穩(wěn)定性。乙烯可以快速提高擬南芥EIN3蛋白水平，在沒有乙烯存在的情況下，EIN3蛋白可以迅速通過EBF1和EBF2所介導的ubiquitin/proteasome途徑而降解。這表明ubiquitin/proteasome途徑通過降解 EIN3蛋白而淬滅乙烯信號，從而表現(xiàn)出

3、對乙烯信號的負調(diào)節(jié)，所以對EIN3蛋白的調(diào)控是乙烯信號轉(zhuǎn)導途徑的關(guān)鍵步驟。對番茄LeEBF1和LeEBF2基因的研究，將使我們對番茄乙烯信號轉(zhuǎn)導、果實成熟及環(huán)境脅迫中防衛(wèi)反應相關(guān)基因調(diào)控的機理更加明確，為利用基因工程技術(shù)改良番茄等作物提供理論依據(jù)。本研究主要取得了以下結(jié)果：
　　①通過RACE和RT-PCR方法從番茄中克隆得到LeEBF1和LeEBF2的全長cDNA序列，其長度分別是2866和2891 bp。序列分析表明，它們的開

4、放閱讀框分別是1911和1995bp，分別編碼637和665個氨基酸殘基，在氨基端含保守的F-box區(qū)域，在羧基端有14個亮氨酸重復單位。通過 BLAST軟件和DNAMAN分析表明這兩個基因的氨基酸序列同源性高達58.6％，同時與其他物種EBF蛋白的F-box區(qū)域同源性達24.4％-73.2％。由此我們推論LeEBF1和LeEBF2可能屬于EBF蛋白家族。
　?、?Northern雜交結(jié)果表明：LeEBF1與 LeEBF2在野生型