番茄EIN3蛋白質表達載體的構建及表達純化.pdf_第1頁
已閱讀1頁，還剩52頁未讀， 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內容提供方，若內容存在侵權，請進行舉報或認領

文檔簡介

1、在番茄果實的發(fā)育成熟過程中，乙烯起著重要的調控作用，而Le-EIN3蛋白質是番茄乙烯信號轉導途徑上一個重要的轉錄因子，番茄 EIL3 基因的表達能夠活化已知的乙烯傳導過程，并啟動一系列由乙烯調節(jié)的目標基因的表達，它對乙烯反應起正調控作用。番茄EIN3的作用和調控機制并不完全清楚，為了能夠對番茄果實發(fā)育成熟機理進行深入的研究，克隆番茄 EIL3 基因并表達、純化該蛋白具有十分重要的意義， 番茄 EIL3 基因在GenBank中的序

2、號為AF328786，其編碼序列全長為1844bp。經同源分析，該基因序列與煙草的EIL3基因序列具有 79％的同源性，與擬南芥EIN3、EIL1、EIL2和EIL3的同源性分別為59％、56％、52％、46％。根據(jù)番茄EIL3基因序列設計引物，PCR擴增EIL3目的基因。經酶切、連接、轉化等操作構建pET15b-EIL3、pET30a-ElL，3和pPIC9k-EIL3這三種表達載體，并通過PCR快速檢測、酶切檢測、測序等方法對陽性克

3、隆子進行了鑒定檢測。將pET15b-EIL3、pET30a-EIL3轉化進入BL21大腸桿菌，構建成兩種原核表達工程菌，然后采用IPTG誘導的方式誘導外源蛋白質的表達，并通過SDS-PAGE、ELISA等方法對誘導表達結果進行鑒定檢測；將pPIC9k-EIL3轉化進入KM71酵母菌，通過G418多拷貝篩選和SDS-PAGE電泳的方法篩選了4株表達效率較高的pPIC9k-EIL3/KM71表達工程菌，采用甲醇誘導的方式誘導表達外源蛋白質，

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽，若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論