IgA腎病病人腭扁桃體單個(gè)核細(xì)胞免疫狀態(tài)及相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、IgA腎病(IgA nephropathy,IgAN)是以腎小球系膜區(qū)IgA沉積為特征的最常見的原發(fā)性腎小球疾病。約占我國原發(fā)性腎小球疾病的40％～47％。該病發(fā)病率高，長期的隨訪發(fā)現(xiàn)IgA腎病是慢性進(jìn)展的疾病，10～20年后約50％患者進(jìn)入終末期腎功能衰竭（尿毒癥），是導(dǎo)致終末期腎功能衰竭的最主要原發(fā)性腎小球疾病。
　　 目前研究發(fā)現(xiàn)，約40％以上的IgAN患者表現(xiàn)為上呼吸道感染（包括扁桃體炎）后癥狀發(fā)作或加重，而切除扁桃體后

2、能明顯改善尿檢異常，有效降低循環(huán)中高IgA水平，重復(fù)腎活檢顯示，系膜區(qū)沉積的IgA強(qiáng)度減弱，通過超過10年的隨訪發(fā)現(xiàn)扁桃體摘除組患者腎臟長期存活率明顯高于非扁桃體手術(shù)組患者，提示扁桃體免疫可能在IgAN發(fā)病機(jī)制中起重要作用。
　　 很多證據(jù)表明IgA腎病患者存在IgA產(chǎn)生的異常，血清IgA水平升高，循環(huán)IgA免疫復(fù)合物增加，外周血中分泌IgA的細(xì)胞增多，體外培養(yǎng)時(shí)外周血單個(gè)核細(xì)胞IgA產(chǎn)生異常，都提示IgA產(chǎn)生增多可能是IgA腎

3、病發(fā)病的中心環(huán)節(jié)。
　　 Suzuki S等發(fā)現(xiàn)副流感嗜血桿菌蛋白刺激使扁桃體單個(gè)核細(xì)胞增殖更明顯，IgA、IgA1水平明顯升高。葡萄球菌M蛋白刺激上調(diào)IgAN扁桃體淋巴細(xì)胞TGF-β的產(chǎn)生，誘導(dǎo)分泌IgA的漿細(xì)胞增多。柯薩奇B4病毒反復(fù)注射小鼠可以誘導(dǎo)與IgA腎病類似的系膜區(qū)IgA和病毒基因的沉積。提示IgA腎病的發(fā)生與上呼吸道尤其是扁桃體對(duì)環(huán)境中存在的細(xì)菌或病毒抗原的粘膜免疫反應(yīng)異常有關(guān)。
　　 前期我們分離鑒定了3

4、7例IgA腎病病人和37例非腎炎慢性扁桃體炎病人的扁桃體隱窩細(xì)菌，發(fā)現(xiàn)兩組之間細(xì)菌譜和數(shù)量無明顯差異；所有病人均檢測(cè)到甲型鏈球菌(α-Hemolytic streptococcus，HS)。來源于IgA腎病組和慢性扁桃體炎組的甲型鏈球菌滅活菌株刺激IgA腎病扁桃體淋巴細(xì)胞促進(jìn)J鏈mRNA陽性IgA細(xì)胞數(shù)增多。
　　 因此我們選擇甲型鏈球菌滅活菌株、細(xì)菌脂多糖體外刺激模擬上呼吸道感染對(duì)IgA腎病病人扁桃體單個(gè)核細(xì)胞的刺激作用。探討

5、
　　 1.IgA腎病組病人扁桃體單個(gè)核細(xì)胞增殖和IgA及IgA1的產(chǎn)生。
　　 2.IgA腎病病人扁桃體B淋巴細(xì)胞Iα-Cα胚系轉(zhuǎn)錄本(Iα-Cα germline transcript)、激活誘導(dǎo)的胞嘧啶脫氨酶(activation induced cytidine deaminase;AID)mRNA的表達(dá)。
　　 3.IgA腎病病人扁桃體單個(gè)核細(xì)胞Th細(xì)胞因子IFN-γ、IL-4基因和蛋白表達(dá)。
　

6、　 4.IgA腎病病人扁桃體單個(gè)核細(xì)胞IgA受體FcαRI表達(dá)及甲型鏈球菌滅活菌株、細(xì)菌脂多糖刺激下FcαRI表達(dá)的變化。
　　 第一章 IgA腎病病人扁桃體單個(gè)核細(xì)胞增殖和IgA及IgA1的產(chǎn)生
　　 目的：
　　 體外模擬上呼吸道感染對(duì)扁桃體單個(gè)核細(xì)胞的刺激作用，觀察不同濃度滅活甲型鏈球菌菌株、細(xì)菌脂多糖對(duì)IgA腎病病人扁桃體單個(gè)核細(xì)胞增殖的影響。觀察滅活甲型鏈球菌菌株、細(xì)菌脂多糖對(duì)IgA腎病病人扁桃體單個(gè)

7、核細(xì)胞分泌IgA、IgA1的影響。
　　 方法：
　　 1.收集26例IgAN病人及25例非腎炎慢性扁桃體炎病人手術(shù)摘除的扁桃體
　　 2.分離培養(yǎng)兩組病人腭扁桃體單個(gè)核細(xì)胞
　　 3.制備甲型鏈球菌滅活菌株
　　 4.MTT檢測(cè)不同濃度甲型鏈球菌滅活菌株、細(xì)菌脂多糖對(duì)扁桃體單個(gè)核細(xì)胞增殖的影響
　　 5.甲型鏈球菌滅活菌株、脂多糖刺激體外培養(yǎng)扁桃體單個(gè)核細(xì)胞72小時(shí)后收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液，

8、ELISA檢測(cè)IgA、IgA1的表達(dá)。
　　 結(jié)論：
　　 1.未刺激和脂多糖刺激后，IgA腎病組較非IgA腎病組扁桃體單個(gè)核細(xì)胞增殖更明顯。
　　 2.甲型鏈球菌滅活菌株、細(xì)菌脂多糖刺激后，IgA腎病組扁桃體單個(gè)核細(xì)胞IgA、IgA1產(chǎn)生明顯增加。
　　 3.甲型鏈球菌滅活菌株刺激后IgA腎病組扁桃體單個(gè)核細(xì)胞體外培養(yǎng)上清液IgA1/IgA比例上升。
　　 提示IgA腎病患者的扁桃體免疫可能存在

9、過高的應(yīng)答狀態(tài)導(dǎo)致IgA產(chǎn)生增多。
　　 第二章IgA腎病病人扁桃體單個(gè)核細(xì)胞IgA類別轉(zhuǎn)換相關(guān)基因的研究
　　 目的：
　　 研究IgAN組與對(duì)照組扁桃體單個(gè)核細(xì)胞IgA類別轉(zhuǎn)換相關(guān)基因表達(dá)水平。從基因水平探討IgAN組扁桃體單個(gè)核細(xì)胞IgA產(chǎn)生異常的分子機(jī)制。
　　 方法：
　　 1.收集IgAN病人及非腎炎慢性扁桃體炎病人手術(shù)摘除的扁桃體。
　　 2.分離兩組病人扁桃體單個(gè)核細(xì)胞并提

10、取細(xì)胞總RNA。
　　 3.實(shí)時(shí)定量熒光PCR檢測(cè)Iα-Cα胚系轉(zhuǎn)錄本(Iα-Cα germline transcript)、激活誘導(dǎo)的胞嘧啶脫氨酶(AID) mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)論：
　　 IgA腎病病人扁桃體單個(gè)核細(xì)胞Iα-Cα胚系轉(zhuǎn)錄本、激活誘導(dǎo)的胞嘧啶脫氨酶(AID)基因表達(dá)水平上調(diào)；可能與IgA腎病病人扁桃體IgA產(chǎn)生異常有關(guān)。
　　 第三章 IgA腎病病人扁桃體單個(gè)核細(xì)胞細(xì)胞因子IFN-

11、γ、IL-4表達(dá)的研究
　　 目的：
　　 觀察甲型鏈球菌滅活菌株、細(xì)菌脂多糖刺激下IgA腎病扁桃體單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)上清液IFN-γ，IL-4表達(dá)的變化。研究IgAN組與對(duì)照組扁桃體單個(gè)核細(xì)胞IFN-γ、IL-4基因表達(dá)水平。
　　 方法：
　　 1.收集26例IgAN病人及25例非腎炎慢性扁桃體炎病人手術(shù)摘除的扁桃體。
　　 2.分離培養(yǎng)兩組病人扁桃體單個(gè)核細(xì)胞。
　　 3.實(shí)時(shí)定量熒光P

12、CR檢測(cè)IFN-γ、IL-4mRNA的表達(dá)。
　　 4.甲型鏈球菌的滅活菌株、細(xì)菌脂多糖刺激體外培養(yǎng)扁桃體單個(gè)核細(xì)胞72小時(shí)后收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液，ELISA檢測(cè)IFN-γ、IL-4的表達(dá)。
　　 結(jié)論：
　　 1、IgA腎病扁桃體單個(gè)核細(xì)胞細(xì)胞因子IFN-γ、IL-4分泌增加和基因表達(dá)水平上調(diào)。
　　 2、甲型鏈球菌滅活菌株刺激下IgA腎病扁桃體分泌IFN-γ下調(diào)；IL-4上調(diào)。
　　 3、細(xì)菌脂

13、多糖刺激下IgA腎病扁桃體分泌IFN-γ和IL-4上調(diào)。
　　 提示IgA腎病扁桃體Th細(xì)胞因子表達(dá)上調(diào)，在適應(yīng)性免疫應(yīng)答中Th2細(xì)胞因子占優(yōu)勢(shì)，可能參與IgAN的發(fā)生，發(fā)展。
　　 第四章IgA腎病病人扁桃體單個(gè)核細(xì)胞IgA受體Fcα RI表達(dá)研究
　　 目的：
　　 研究IgAN組與對(duì)照組扁桃體單個(gè)核細(xì)胞IgA受體FcαRI表達(dá)水平。觀察甲型鏈球菌滅活菌株、細(xì)菌脂多糖刺激下IgA腎病扁桃體單個(gè)核細(xì)胞I

14、gA受體Fcα RI表達(dá)的變化。
　　 方法：
　　 1.收集26例IgAN病人及25例非腎炎慢性扁桃體炎病人手術(shù)摘除的扁桃體。
　　 2.分離培養(yǎng)兩組病人扁桃體單個(gè)核細(xì)胞
　　 3.實(shí)時(shí)定量熒光PCR檢測(cè)FcαRImRNA的表達(dá)
　　 4.甲型鏈球菌滅活菌株、細(xì)菌脂多糖刺激體外培養(yǎng)扁桃體單個(gè)核細(xì)胞72小時(shí)，流式細(xì)胞儀檢測(cè)扁桃體單個(gè)核細(xì)胞Fcα RI陽性細(xì)胞數(shù)
　　 結(jié)論：