鎳化合物致癌機(jī)制的研究.pdf

1、目的:
　　 1、通過(guò)形態(tài)學(xué)方法,研究細(xì)胞對(duì)鎳化合物的攝取方式與狀況;
　　 2、通過(guò)檢測(cè)鎳染毒后細(xì)胞內(nèi)鎳含量的改變,探討不溶性鎳化物對(duì)靶細(xì)胞中鎳含量的影響及致癌機(jī)制;
　　 3、通過(guò)間接免疫熒光法觀察不同濃度不溶性鎳化物對(duì)人肺癌A549細(xì)胞內(nèi)Cap43、HIF-1α蛋白的影響;
　　 方法:
　　 1、用不同濃度的水不溶性NiO和Ni3S2分別處理人肺癌A549細(xì)胞,來(lái)進(jìn)行鎳染毒細(xì)胞的制備;

2、r>　　 2、光學(xué)顯微鏡及透射電鏡觀察細(xì)胞對(duì)不溶性鎳化物的攝取狀況;
　　 3、原子吸收分光光度計(jì)檢測(cè)染鎳48 h后細(xì)胞內(nèi)鎳含量并估算其攝取率,并比較相同處理濃度下A549細(xì)胞對(duì)不同鎳化合物的攝取量;
　　 4、用不同濃度的水不溶性Ni3S2處理人肺癌A549細(xì)胞,24 h后用間接免疫熒光法觀察染毒后細(xì)胞內(nèi)Cap43與HIF-1α蛋白表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1、鎳染毒細(xì)胞模型制備成功2、光鏡下

3、觀察所見(jiàn)染毒6 h后,部分鎳化物即己進(jìn)入細(xì)胞,并分散于細(xì)胞質(zhì)中;24 h后,大部分鎳化物都已進(jìn)入細(xì)胞,并且產(chǎn)生胞吞小泡;染毒48h后,光鏡觀察,已經(jīng)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的鎳化物大部分聚集于細(xì)胞核周?chē)鷪D。
　　 3、透射電鏡下觀察所見(jiàn)染毒48 h后,經(jīng)透射電鏡下觀察,細(xì)胞吞噬鎳化合物已形成胞吞小泡,并可見(jiàn)其大部分均圍繞在細(xì)胞核周?chē)?br>　　 4、細(xì)胞內(nèi)鎳含量的測(cè)定及比較經(jīng)過(guò)終濃度為0,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3μg/c

4、m2的Ni3S2處理后,平均每105個(gè)細(xì)胞中含鎳量為0.0024,0.0771,0.0157,0.2268,0.4754,0.7000,0.9882μg;終濃度為0,0.5,1.0,2.0,4.0,8.0,16μg/cm2的NiO處理后,平均每105個(gè)細(xì)胞中含鎳量為0.003,0.070,0.108,0.255,0.628,1.543,6.571μg;相同濃度鎳顆粒物(0.5,1.0,2.0μg/cm2)處理下,Ni3S2處理組細(xì)胞鎳含

5、量分別為(0.0771±0.0066),(0.1574±0.0190),(0.4754±0.1121)μg/105個(gè)細(xì)胞,均高于NiO處理組(0.0701±0.0032),(0.1081±0.0159),(0.2552±0.0415)μg/105個(gè)細(xì)胞,各劑量組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 5、細(xì)胞內(nèi)Cap43、HIF-1α蛋白的表達(dá)情況隨著Ni3S2濃度的增加,細(xì)胞內(nèi)Cap43與HIF-1α蛋白表達(dá)量均增加。