節(jié)桿菌催化甾體化合物C1,2脫氫規(guī)律的研究.pdf

1、本文研究了簡(jiǎn)單節(jié)桿菌TCCC10037(Arthrobacter simplex)和球形節(jié)桿菌TCCC11039(Arthrobacter globiformis)對(duì)八種3-酮甾體底物的C1，2位脫氫轉(zhuǎn)化反應(yīng)，并研究了在四種不同的反應(yīng)體系中，即完整細(xì)胞體系、雙液相體系、原生質(zhì)體體系和破碎細(xì)胞抽提液體系中的脫氫轉(zhuǎn)化反應(yīng)。
　　 研究球形節(jié)桿菌的生長(zhǎng)特性，發(fā)現(xiàn)球形節(jié)桿菌與簡(jiǎn)單節(jié)桿菌的生長(zhǎng)狀況極其相似，對(duì)球形節(jié)桿菌的轉(zhuǎn)化條件及工藝進(jìn)行

2、了優(yōu)化。
　　 研究節(jié)桿菌在完整細(xì)胞體系下的C1，2位脫氫轉(zhuǎn)化。簡(jiǎn)單節(jié)桿菌和球形節(jié)桿菌對(duì)不同甾體底物的C1，2位脫氫轉(zhuǎn)化各不相同。同一微生物轉(zhuǎn)化不同官能團(tuán)的甾體底物的轉(zhuǎn)化率有很大差異；不同微生物催化同一種甾體底物的轉(zhuǎn)化率也不同。
　　 研究節(jié)桿菌在雙液相體系下的C1，2位脫氫轉(zhuǎn)化，即增大甾體底物溶解度對(duì)轉(zhuǎn)化的影響。構(gòu)建了有機(jī)相為四氯化碳，水相為已培養(yǎng)至符合投料條件的發(fā)酵液，有機(jī)/水相比率為3:7(v：v)的兩相系統(tǒng)，其中

3、含有5g/L的甾體底物和0.2g/L的甲萘醌。雙液相體系中的C1，2位脫氫轉(zhuǎn)化率比普通直接轉(zhuǎn)化的轉(zhuǎn)化率有所降低；簡(jiǎn)單節(jié)桿菌在雙液相體系中的轉(zhuǎn)化率大多明顯高于球形節(jié)桿菌。
　　 研究節(jié)桿菌在原生質(zhì)體體系下的C1，2位脫氫轉(zhuǎn)化，即細(xì)胞壁對(duì)C1，2位脫氫轉(zhuǎn)化的影響。原生質(zhì)體的最佳制備條件為：青霉素濃度1.5U/mL，青霉素處理時(shí)間8～10小時(shí)，溶菌酶濃度10mg/mL，溶菌酶酶解時(shí)間80～100分鐘。原生質(zhì)體體系下的C1，2位脫氫轉(zhuǎn)化

4、率明顯低于完整細(xì)胞轉(zhuǎn)化與雙液相轉(zhuǎn)化。
　　 研究節(jié)桿菌在破碎細(xì)胞抽提液體系下的C1，2位脫氫轉(zhuǎn)化，即研究細(xì)胞壁、細(xì)胞膜對(duì)C1，2位脫氫轉(zhuǎn)化的影響。破碎細(xì)胞抽提液的最佳制備條件為：超聲波輸出功率380W，工作/間歇時(shí)間6s/5s，總時(shí)間7min，緩沖液為1/15mol/L pH7.0的PBS緩沖液。節(jié)桿菌在細(xì)胞破碎體系中C1，2位脫氫轉(zhuǎn)化率低于完整細(xì)胞轉(zhuǎn)化和雙液相轉(zhuǎn)化，但高于原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化。
　　 可以看出在完整細(xì)胞中的C1