滇重樓內(nèi)生真菌及其甾體化合物的初步研究.pdf

1、滇重樓屬于延齡草科(Trilliaceae)重樓屬多年生草本植物，主要分布于我國云南、四川、貴州等地。滇重樓是一種重要的藥用植物，主要以其干燥根狀莖入藥，根狀莖中含有的活性成分為C-27甾體骨架的薯蕷皂苷元和偏諾皂苷元及其配糖體。植物內(nèi)生菌(Endophyte)是指那些在其生活史的一定階段或全部階段生活于健康植物組織或器官內(nèi)部的真菌或細菌，宿主不表現(xiàn)出外在病害癥狀。本論文對滇重樓(Parispolyphyllavar.yunnanens

2、is(Franch)Hand)內(nèi)生真菌的分離和鑒定、甾體化合物薯蕷皂苷元ELISA檢測條件的摸索、內(nèi)生真菌中甾體化合物分析、內(nèi)生真菌提取物的抗菌活性進行初步研究，得出以下結果。 1、本研究首次對滇重樓根狀莖內(nèi)生真菌分離的方法進行探討，對根狀莖的表面消毒時間、分離部位和培養(yǎng)基的選擇進行摸索，獲得較為理想的分離效果。共分離到內(nèi)生真菌133株，根據(jù)其形態(tài)特征，取28株代表性的真菌，經(jīng)鑒定隸屬于10個屬，分別為酵母屬(Candida)(

3、No.1)、腐霉屬(Pythium)(No.7)、絲核菌屬(Rhizoctonia)(No.9)、木霉屬(Trichoderma)(No.36)和帚梗柱孢屬(Cylindrocladium)(No.108)各1株，青霉屬(Penicillium)(No.15和No.65)2株，頭孢霉屬(Cephalosporium)(No.46、No.73和No.84)、曲霉屬(Aspergillus)(No.47、No.55和No.61)和擬青霉屬(

4、Paecilomyces)(No.60、No.80和No.81)各3株，鐮孢菌屬(Fusarium)(No.14、No.24、No.32、No.38和No.62)5株。 2、當采用ELISA檢測時，包被物的稀釋倍數(shù)為1∶50，二抗的稀釋倍數(shù)為1∶400，當薯蕷皂苷元濃度在2.44×10-6mg/mL～6.25×10-4mg/mL范圍內(nèi)，濃度自然對數(shù)與吸光值之間存在較好的線性關系。特異性檢測顯示，薯蕷皂苷元抗體相對于膽甾醇、β-谷

5、甾醇、麥角甾醇的特異性較好。3、Liebermann-Burchard顯色檢測25、38、46、73、125號菌株的菌絲懸浮液甾體化合物產(chǎn)率較高；ELISA檢測9、25、38、46、125號菌株的菌絲懸浮液中薯蕷皂苷元及其衍生物的含量較高；TLC檢測表明：80、81、84、113號菌株菌絲正丁醇提取物中可能有薯蕷皂苷元；47、79、80、81、108、113、130號菌株的菌絲提取物中可能有麥角甾醇；14、65、130號菌株的菌液提取物

6、中可能有麥角甾醇。此外，7、32、36、55、84、125菌株的濾液正丁醇提取物，9、15、32、36、38、46、61、62、73、84、119、125菌株的菌絲正丁醇提取物中可能還含有其他甾體類化合物。 4、28株內(nèi)生真菌正丁醇提取物抗菌活性檢測表明，在菌液正丁醇提取物中，24號菌株和55號菌株正丁醇提取物的抑菌活性較強；在菌絲正丁醇提取物中，9號菌株和130號菌株正丁醇提取物的抑菌活性較強。 本研究將為繼續(xù)分離滇重