格氏物簡單節(jié)桿菌微生物脫氫研究.pdf

1、該文首先對甾體藥物工業(yè)現(xiàn)狀、甾體藥物生產(chǎn)新資源的開發(fā)、微生物轉(zhuǎn)化在甾體藥物轉(zhuǎn)化中的應(yīng)用、甾體激素的微生物脫氫研究進(jìn)展及新技術(shù)的開發(fā)進(jìn)行全面綜述,并進(jìn)行了展望.對實驗室保藏的簡單節(jié)桿菌通過初篩后并進(jìn)行菌種的分離純化,獲得一株轉(zhuǎn)化率轉(zhuǎn)高的菌株02-7-6-14,以此為出發(fā)株進(jìn)行菌種選育.采用紫外誘變,并結(jié)合Cs<'137>-γ射線輻照復(fù)合誘變處理,獲得較佳誘變株Q2-2-2-1.應(yīng)用于格氏物脫氫反應(yīng),轉(zhuǎn)化率為86.54﹪,轉(zhuǎn)化率比出發(fā)株02

2、-7-6-14提高了5﹪左右,且遺傳性狀穩(wěn)定.該文考察了培養(yǎng)基組成及環(huán)境因子對該誘變株產(chǎn)脫氫酶的影響.通過單因素條件優(yōu)化及正交試驗確定最佳培養(yǎng)基組成為:葡萄糖0.4﹪,玉米漿1.2﹪,蛋白胨0.3﹪,KH<,2>PO<,4>0.2﹪.產(chǎn)酶最適條件為:接種量20﹪,發(fā)酵初始培養(yǎng)基pH7.0~8.0,搖瓶裝液量為100ml/250ml,誘導(dǎo)物加量為5mg/100ml,在培養(yǎng)期初期加入格氏物(誘導(dǎo)物)對產(chǎn)酶有很大的促進(jìn)作用.金屬離子Cu<'2

3、+>和Fe<'3+>對產(chǎn)酶有很大的抑制作用,Zn<'2+>和Fe<'2+>對產(chǎn)酶也有一定的抑制作用,Co<'2+>和Mg<'2+>對產(chǎn)酶有一定的促進(jìn)作用.表面活性劑泡敵和吐溫80對產(chǎn)酶有一定的促進(jìn)作用,而洗衣粉和SDS對菌體生長和產(chǎn)酶有很大的抑制作用.該文首次采用簡單節(jié)桿菌游離細(xì)胞進(jìn)行了格氏物脫氫反應(yīng)動力學(xué)研究.其中包括酶穩(wěn)定性試驗,底物濃度對反應(yīng)速度的影響,酶量對轉(zhuǎn)化初速度的影響.由此建立了該反應(yīng)的動力學(xué)模型及相應(yīng)的動力學(xué)方程,并經(jīng)線