人皰疹病毒8型基因工程抗原的制備和應(yīng)用.pdf

1、　　目的:構(gòu)建人皰疹病毒8型(HHV8)小衣殼蛋白(ORF65)的原核高效表達(dá)克隆，制備用于HHV8感染血清學(xué)診斷的基因工程抗原。　　方法:應(yīng)用BCBL-1細(xì)胞(HHV8陽(yáng)性而EBV陰性)制備粗提細(xì)胞抗原，并用SephadexG-75層析柱初步純化，獲得HHV8細(xì)胞工程抗原。應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增HHV8ORF65編碼區(qū)，PCR產(chǎn)物與原核表達(dá)載體pThioHisA分別雙酶切后連接，轉(zhuǎn)化宿主菌E.coliBL21，IPTG誘導(dǎo)融合蛋白表達(dá)，

2、經(jīng)帶有6個(gè)組氨酸標(biāo)簽的親和層析柱純化獲得基因工程抗原，Westernblot檢測(cè)其抗原性和特異性。選擇最適抗原濃度包被96孔ELISA反應(yīng)板，對(duì)相關(guān)病人進(jìn)行檢測(cè)，并與Biotrin公司生產(chǎn)的HHV8IgM和HHV8IgG抗體IFA檢測(cè)試劑盒和Qiagen公司ELISA檢測(cè)試劑盒進(jìn)行比較。　　結(jié)論:HHV8ORF65重組蛋白具有良好的抗原性和特異性，進(jìn)一步完善后可用于HHV8感染的臨床檢測(cè)，為進(jìn)一步研制開(kāi)發(fā)新型HHV8診斷試劑提供了有價(jià)