人類8型皰疹病毒ORF45和ORF72重組蛋白純化和抗體制備.pdf

1、人類8型皰疹病毒(Human herpesvirus8，HHV-8)，又名卡波西肉瘤相關(guān)病毒(Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus，KSHV)，HHV-8在宿主細(xì)胞內(nèi)所存在的狀態(tài)不同，可分為潛伏感染階段和裂解復(fù)制階段。其中ORF45是由立即早期基因編碼的γ型皰疹病毒所特有的蛋白，它能夠與干擾素調(diào)節(jié)因子7(Interferonregulator factor7，IRF-7)相互作用，抑制IRF-7

2、的磷酸化和入核，抑制了Ⅰ型干擾素的表達(dá)，從而使得病毒逃避宿主的免疫應(yīng)答。另外，ORF45在病毒建立潛伏態(tài)以及進入裂解復(fù)制的過程中也發(fā)揮了重要作用。ORF72基因?qū)儆跐摲诨?，無內(nèi)含子，編碼的是病毒周期蛋白(v-cyclinD)，與細(xì)胞周期蛋白D2相似性為64％，病毒所編碼的細(xì)胞周期蛋白具有雙重作用，一方面表現(xiàn)出宿主細(xì)胞G1期周期蛋白的特點，另一方面又能使宿主細(xì)胞周期失調(diào)。
　　 本文以pET28a作為載體，構(gòu)建了pET28a-

3、ORF45(1-238 aa)和pET28a-ORF72(1-198 aa)表達(dá)質(zhì)粒，并分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)，ORF45(1-238 aa)蛋白和ORF72(1-198 aa)蛋白在IPTG濃度為0.1 mmol/L，37℃，誘導(dǎo)時間為4 h的條件下均能大量表達(dá)。在此基礎(chǔ)上，利用Ni親和層析的方法純化ORF45(1-238 aa)蛋白和ORF72(1-198 aa)蛋白。以純化的ORF45(1-238 aa)蛋白和ORF7