鯉皰疹病毒Ⅱ型ORF25蛋白單克隆抗體的制備和鯉TRIM25基因的克隆與序列分析.pdf

1、鯉皰疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus2，CyHV-2)，是一種感染鯽（Carassiusauratus）、金魚（Carassius auratus）、及鯉與金魚雜交體的高致病性病毒，CyHV-2首次發(fā)病是在日本養(yǎng)殖的金魚中;2011、2012年，Wang等首次報道了CyHV-2可感染養(yǎng)殖鯽，造成了我國異育銀鯽（Carassius auratusgibelio）的大規(guī)模死亡。2013年，武漢、廣州、江蘇等地也報道了該病

2、的暴發(fā)，自發(fā)病異育銀鯽中檢測到CyHV-2。目前控制該病仍缺乏有效的藥物和方法，因此，迫切需要研制并建立ELISA等免疫學(xué)快速檢測方法，為該病的臨床診斷及檢測提供有效工具。
　　本研究通過克隆CyHV-2具有良好抗原特性的膜蛋白ORF25基因部分片段，并將擴增產(chǎn)物連接到原核表達(dá)載體pGEX-KG上，成功構(gòu)建了CyHV-2-ORF25-KG重組質(zhì)粒。IPTG將其誘導(dǎo)后，SDS-PAGE分析表明:目的蛋白得到表達(dá)，分子量大小為42 K

3、Da，且主要表達(dá)在包涵體中。用純化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠，多次免疫后通過細(xì)胞融合，篩選出一株單抗5C6;經(jīng)間接免疫熒光試驗和Western Blot試驗驗證，這株單抗可以特異性的識別CyHV-2ORF25蛋白。本實驗通過制備CyHV-2ORF25蛋白的單克隆抗體，為研究CyHV-2的致病機理及檢測方法的建立奠定了基礎(chǔ)。
　　為了克隆和表達(dá)鯉TRIM25，本研究提取鯉卵巢組織總RNA，以反轉(zhuǎn)錄獲得的cDNA為模版，通過PCR