山羊痘病毒ORF31、ORF117、ORF72基因的原核表達及磷酸酶活力分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究將山羊痘病毒的DNA結(jié)合核衣殼蛋白(ORF31)、融合蛋白(ORF117)、蛋白磷酸酶(ORF72)3個編碼基因，分別克隆至pET-30a(+)原核表達載體后轉(zhuǎn)化入大腸桿菌細胞。重組表達菌經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后進行SDS-PAGE電泳，結(jié)果顯示3個重組蛋白均在原核細胞中獲得表達，且大部分以包涵體形式存在，ORF72的蛋白的表達產(chǎn)物有少量可溶性蛋白。表達產(chǎn)物經(jīng)鎳柱純化進行western blotting分析，ORF72蛋白能與山羊痘陽性血

2、清反應(yīng)，證明ORF72蛋白具有免疫反應(yīng)原性，另外兩種蛋白則無反應(yīng)原性。對磷酸酶活力鑒定試驗結(jié)果表明，其能夠水解對硝基苯磷酸二鈉(PNPP)，最適pH值為6.0;酶促反應(yīng)的最適溫度均為40℃。磷酸酶抑制劑能夠抑制其磷酸酶活性， Cd2+、Cr3+重金屬離子的鹽溶液對酶無抑制作用，Zn2+、Mg2+金屬離子的鹽溶液對酶抑制作用較弱，金屬離子Ag+、Hg2+、Pb2+的鹽溶液對該酶有較強的抑制作用。本研究為山羊痘病毒蛋白功能的鑒定、診斷抗原的

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