添加COX-2抑制劑塞來(lái)昔布治療難治性癲癇模型大鼠的研.pdf

1、目的：將COX-2抑制劑與抗癲癇藥物的聯(lián)合用于難治性癲癇治療,觀察難治性癲癇的發(fā)作的情況,探討抗癲癇藥聯(lián)合COX-2抑制劑治療難治性癲癇的機(jī)制,為臨床治療難治性癲癇提供一種新思路。方法：1、實(shí)驗(yàn)分組:本實(shí)驗(yàn)設(shè)立5個(gè)實(shí)驗(yàn)組,分別為假手術(shù)組,難治性癲癇模型生理鹽水治療組(生理鹽水組)、難治性癲癇模型卡馬西平治療組(卡馬西平治療組)、難治性癲癇模型卡馬西平聯(lián)合塞來(lái)昔布治療組(聯(lián)合治療組)、難治性癲癇模型塞來(lái)昔布治療組(塞來(lái)昔布治療組)。2、動(dòng)

2、物模型的建立:a、模型組:采用海人酸海馬快速點(diǎn)燃方法建立癲癇大鼠模型,即將海人酸(Kainic Acid,KA)1.5ug(1ug/ul)定點(diǎn)注入wistar大鼠右側(cè)海馬CA3區(qū)位置,注射區(qū)和額竇安裝電極,縫合后觀察。按照 Racines分級(jí)進(jìn)行行為觀察同時(shí)進(jìn)行腦電圖檢測(cè),若大鼠在0.5-6小時(shí)內(nèi)出現(xiàn)3-5級(jí)癇性發(fā)作且腦電圖都異常,表明癲癇模型造模成功。b、假手術(shù)組:將等量的生理鹽水注入大鼠右側(cè)海馬CA區(qū)注射,注射區(qū)和額竇安裝電極,縫合

3、后觀察3、難治性癲癇模型的建立:卡馬西平灌胃每日兩次,用量為125mg/kg,連續(xù)28天,然后觀察對(duì)大鼠的是否有癇樣發(fā)作并測(cè)一次腦電圖。4、篩選標(biāo)準(zhǔn):a、腦電圖,正常的大鼠腦電圖表現(xiàn)為5-12 Hz的α波或17-19Hz的β波,波幅20-80μV,即基礎(chǔ)波,表現(xiàn)為有高幅尖波等異于基礎(chǔ)波的腦電波可作為診斷癲癇發(fā)作的依據(jù);b、按照Racines分級(jí)觀察:0級(jí):正常;1級(jí):面肌痙攣,如動(dòng)須、節(jié)律性咀嚼等;2級(jí):節(jié)律性點(diǎn)頭;3級(jí):前肢痙攣;4級(jí)

4、:站立并前肢痙攣或強(qiáng)直;5級(jí):持續(xù)站立或不能站立并跌倒,上下肢抽搐。發(fā)作達(dá)到1級(jí)及以上為異常。c、腦電圖結(jié)果和行為觀察結(jié)果都異常表明難治性癲癇模型造模成功。5、藥物治療:5組實(shí)驗(yàn)組分別給予相應(yīng)組的藥物治療28天。6、檢測(cè)指標(biāo):觀察大鼠癲癇發(fā)作情況、腦電圖,p糖蛋白及COX-2免疫組化檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。結(jié)果：1、聯(lián)合治療的療效:治療28天后,大鼠癲癇發(fā)作程度及腦電圖結(jié)果表明聯(lián)合卡馬西平和塞來(lái)昔布治療難治性癲癇模型比卡馬西平單獨(dú)治療(p=0.0

5、44,p<0.05)和塞來(lái)昔布單獨(dú)治療(p=0.012,p<0.05)療效好。2、單藥物治療效果:塞來(lái)昔布治療組、卡馬西平治療組和生理鹽水治療組三組間的療效無(wú)差別(p=0.50,p>0.05),表明卡馬西平或塞來(lái)昔布單獨(dú)治療難治性癲癇無(wú)效果。3、、塞來(lái)昔布對(duì)難治性癲癇模型大鼠腦組織中COX-2和p糖蛋白的影響:通過(guò)免疫組化檢測(cè)發(fā)現(xiàn)聯(lián)合治療組中大鼠大腦中p糖蛋白及COX-2的含量比生理鹽水組4、大鼠腦組織中COX-2與p糖蛋白的相關(guān)性:治

6、療28天后,通過(guò)光密度分析大鼠腦組織中p糖蛋白與COX-2的含量,結(jié)果顯示:大鼠腦組織中COX-2與p糖蛋白呈直線正相關(guān)關(guān)系(r=0.777),提示在本實(shí)驗(yàn)中p糖蛋白的表達(dá)與cox-2有關(guān)。5、COX-2表達(dá)高低對(duì)治療效果的影響:將卡馬西平治療組與聯(lián)合治療組的難治性癲癇模型大鼠中, COX-2低表達(dá)模型大鼠的藥物治療效果比高表達(dá)模型大鼠治療效果好(p=0.025,p<0.05)。6、p糖蛋白表達(dá)高低對(duì)治療效果的影響:在卡馬西平治療組與聯(lián)

7、合治療組的難治性癲癇模型大鼠中, p糖蛋白低表達(dá)模型大鼠的藥物治療效果比高表達(dá)模型大鼠治療效果好(p=0.028, p<0.05)。結(jié)論：cox-2抑制劑塞來(lái)昔布聯(lián)合抗癲癇藥物卡馬西平治療難治性癲癇模型大鼠能使大鼠發(fā)作明顯減少,同時(shí)COX-2及p糖蛋白表達(dá)減少,表明難治性癲癇的控制與COX-2及p糖蛋白的表達(dá)減少相關(guān)。推測(cè)塞來(lái)昔布聯(lián)合卡馬西平治療難治性癲癇的機(jī)制可能是通過(guò)COX-2抑制劑抑制COX-2表達(dá),導(dǎo)致p糖蛋白表達(dá)減少,從而使卡