自噬在TOCP誘發(fā)成年母雞遲發(fā)性神經(jīng)毒性中的作用探討.pdf

1、目的：
　　利用三鄰甲苯基磷酸酯（Tri-ortho-cresyl phosphate, TOCP）誘導(dǎo)建立成年母雞遲發(fā)性神經(jīng)?。∣PIDN）的模型，觀察細胞自噬在TOCP誘發(fā)的遲發(fā)性神經(jīng)毒性發(fā)生、發(fā)展過程中的變化，揭示自噬與TOCP誘發(fā)OPIDN的聯(lián)系，探索OPIDN發(fā)生的可能機制。為進一步了解和揭示神經(jīng)退行性病變的機理提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　將實驗?zāi)鸽u隨機分為對照組和實驗組，實驗組35只，對照組7只。實驗組

2、喂以裝有TOCP（劑量為750 mg/kg）的醫(yī)用膠囊，進行一次染毒,對照組則喂以裝有等量植物油的膠囊，觀察實驗雞的遲發(fā)性神經(jīng)毒性的發(fā)生情況，分別在不同時間點（染毒1d、3d、5d、7d、10d、14d、21d）處死動物，分離脊髓與坐骨神經(jīng)，Western blot法測定自噬相關(guān)蛋白LC3的表達，取部分新鮮脊髓與坐骨神經(jīng)組織固定供作制備石蠟切片和電鏡切片，光鏡下觀察常規(guī)病理學(xué)改變，免疫組織化學(xué)法檢測溶酶體相關(guān)膜糖蛋白LAMP-1的表達，

3、透射電鏡技術(shù)觀察組織的超微結(jié)構(gòu)。
　　結(jié)果：
　　1.一般情況：染毒后實驗雞活動減少，食量減退，于染毒第三天后活動和食量恢復(fù)到染毒前水平,第7天開始出現(xiàn)OPIDN癥狀，實驗組第14天、第21天母雞體重增長率與對照組比較下降（P<0.05）。
　　2. OPIDN臨床癥狀：實驗組雞在TOCP染毒后第7天左右出現(xiàn)肢體活動減少、下肢行走輕微不協(xié)調(diào)；第10天時出現(xiàn)共濟失調(diào)，好蹲坐，雙下肢無力，行走不穩(wěn)，癥狀隨時間延長呈進行性加

4、重，第15天，行走極不協(xié)調(diào)，經(jīng)常跌倒，并逐漸加重，第18天，癥狀嚴重的動物出現(xiàn)癱瘓，不能站立，直至第21天實驗結(jié)束，期間動物正常進食及飲水。對照組動物未觀察到任何OPIDN癥狀。
　　3. HE染色結(jié)果：脊髓神經(jīng)元細胞較對照組明顯腫脹，部分細胞胞漿淡染，胞核模糊不清；神經(jīng)元細胞出現(xiàn)核固縮和細胞胞漿空泡化；坐骨神經(jīng)纖維排列稀疏、腫脹，著色變淡和結(jié)構(gòu)紊亂。
　　4.電鏡結(jié)果：正常的神經(jīng)組織中小膠質(zhì)細胞和神經(jīng)元形態(tài)正常，髓鞘緊密，

5、板層清晰。坐骨神經(jīng)的髓鞘蔥管樣改變明顯且模糊不清晰，多處板層松散、破裂甚至崩解。
　　5.隨著染毒時間的延長，實驗雞的OPIDN癥狀加重，分別用Western blot、免疫組化法檢測雞脊髓、坐骨神經(jīng)自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ的表達，隨著染毒時間的延長，蛋白表達增多，說明TOCP誘發(fā)的OPIDN可能跟自噬有關(guān)。
　　6.免疫組化法檢測實驗雞脊髓、坐骨神經(jīng)LAMP-1的表達，隨著染毒時間的延長，蛋白表達增多，存在一定的時效關(guān)系。<