骨化三醇調(diào)節(jié)慢性哮喘小鼠氣道重塑的機(jī)制研究.pdf

1、近年來，作為哮喘慢性化、嚴(yán)重化、持續(xù)化的病理基礎(chǔ)，氣道重塑在哮喘防治中的潛在作用被廣為關(guān)注。它不僅是激素抵抗性哮喘的病理基礎(chǔ)，也是不可逆性氣道阻塞和氣道高反應(yīng)性的病理基礎(chǔ)。作為Vit-D在體內(nèi)極其重要的的代謝產(chǎn)物之一，骨化三醇（羅蓋全，Rocalirol）在哮喘的治療中不僅對于氣道慢性炎癥而且對于免疫應(yīng)答均起到一定的調(diào)節(jié)作用。但至今國內(nèi)外均未見關(guān)于骨化三醇對哮喘氣道重塑的報道。該研究設(shè)計(jì)從體內(nèi)、外兩個方面觀察骨化三醇對支氣管哮喘氣道重塑

2、的影響，并進(jìn)一步探討其作用機(jī)制，為推廣其臨床應(yīng)用提供依據(jù)。
　　該項(xiàng)內(nèi)容分為兩個部分：
　　第一部分，骨化三醇調(diào)節(jié)哮喘小鼠氣道重塑及NF-κB信號通路的研究
　　目的：觀察骨化三醇對哮喘小鼠氣道重塑的影響，并進(jìn)一步探討其機(jī)制。方法：實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為對照組、哮喘組和VD組。采用卵白蛋白致敏及激發(fā)的方法制備小鼠哮喘氣道重塑的模型；選擇HE染色法觀察氣道壁病理改變；Masson染色觀察氣道壁膠原染色情況，AB-PAS染色觀察

3、杯狀細(xì)胞增生情況，計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)測定氣道形態(tài)學(xué)指標(biāo)，蛋白免疫印記法檢測NF-κB p65的蛋白水平。結(jié)果：(1)骨化三醇對哮喘氣道重塑具有部分逆轉(zhuǎn)的作用；(2)骨化三醇能明顯抑制哮喘肺組織NF-κB p65的核易位。結(jié)論：骨化三醇的干預(yù)可顯著減輕哮喘氣道重塑的病理改變；這一作用可能與其對哮喘肺內(nèi)NF-κB活化的抑制作用有關(guān)。
　　第二部分，骨化三醇對哮喘小鼠氣道平滑肌細(xì)胞凋亡及NF-κB信號通路的影響
　　目的：檢測骨化

4、三醇對哮喘小鼠氣道平滑肌細(xì)胞（airway smooth muscle cells,ASMCs）的凋亡及其核轉(zhuǎn)錄因子-κB信號通路的影響，從細(xì)胞及分子兩個水平探究Rocalirol對哮喘氣道重塑的可能作用機(jī)制。方法：原代培養(yǎng)正常及哮喘小鼠ASMCs，以Rocalirol作為干預(yù)因素。流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞凋亡，熒光顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化；凝膠遷移滯后實(shí)驗(yàn)(EMSA法)檢測NF-κB的DNA結(jié)合活性；實(shí)時熒光定量RT-PCR法和蛋白免疫