藍(lán)玉簪顆粒治療慢性哮喘小鼠氣道重建的實驗研究.pdf

1、研究背景：哮喘是由多種細(xì)胞和細(xì)胞組分參與的氣道慢性炎癥性疾病。有證據(jù)表明哮喘患者氣道慢性炎癥反復(fù)發(fā)作可以導(dǎo)致氣道重建。氣道重建是指由于哮喘反復(fù)發(fā)作而導(dǎo)致的氣道壁重新塑形，主要表現(xiàn)為氣道上皮細(xì)胞增生和化生，氣道上皮下纖維化及膠原沉積，氣道平滑肌增厚、粘膜下腺體增生肥大及新生小血管生成等。氣道重建已被認(rèn)為是哮喘的重要特征之一，它可以引起氣道壁增厚，氣道高反應(yīng)性和肺功能不可逆性進(jìn)展性降低，其發(fā)展程度與哮喘的危重程度相關(guān)。
　　糖皮質(zhì)激素

2、作為主要的抗炎用藥物，是當(dāng)前最為有效的哮喘治療方法，不幸的是，慢性哮喘患者長期或者不定期服用糖皮質(zhì)激素，特別是長期服用激素患者會產(chǎn)生許多嚴(yán)重的副作用。
　　哮喘傳統(tǒng)中醫(yī)藥治療歷史悠久，療效顯著，將是除激素治療外有效的治療方法之一。藍(lán)玉簪龍膽為我國傳統(tǒng)醫(yī)藥，多用于治療哮喘，慢性支氣管炎，咳嗽，肺部感染等急、慢性呼吸道疾病。中藥藍(lán)玉簪顆粒主要由藍(lán)玉簪龍膽和三七總甙組成，臨床應(yīng)用及藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)藍(lán)玉簪顆?？梢燥@著提高SOD的活性，改善氧

3、化/抗氧化平衡，抑制膠原沉積，具有很強(qiáng)的抗炎和抗纖維化效應(yīng)，可有效干預(yù)博來霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化損傷。
　　然而，藍(lán)玉簪顆粒治療慢性哮喘氣道重建的影響及作用機(jī)制仍然不明，本研究目的在于通過建立慢性哮喘小鼠動物模型，比較藍(lán)玉簪顆粒和地塞米松對慢性哮喘動物模型氣道炎癥和氣道重建的治療效應(yīng)，探討中藥藍(lán)玉簪顆粒治療支氣管哮喘氣道重建的作用及其初步機(jī)制，為其臨床廣泛應(yīng)用于哮喘治療奠定理論基礎(chǔ)。
　　方法：1．建立慢性哮喘BABL/C小

4、鼠動物模型，將OVA100μg加2.6mg氫氧化鋁溶于0.2mLPBS溶液中制成懸液，于第1，7，14日給BABL/C小鼠腹腔注射致敏，第15日開始以30g/LOVA生理鹽水溶液霧化吸入激發(fā)，每日1次，每次30min，連續(xù)6wk。
　　2．觀察并比較藍(lán)玉簪顆粒及地塞米松干預(yù)后對慢性哮喘小鼠氣道炎癥、氣道上皮下纖維化以及TGF-β1表達(dá)的影響。在成功構(gòu)建動物模型的基礎(chǔ)上將40只BABL/C小鼠隨機(jī)平均分為正常對照組（A組）、慢性哮喘

5、模型組（B組）、藍(lán)玉簪顆粒治療組（C組）和地塞米松治療組（D組）。蘇木素-伊紅（HE）染色觀察各組小鼠肺組織一般病理學(xué)改變，并對小氣道壁炎癥細(xì)胞浸潤進(jìn)行半定量評分；天狼猩紅（SR）染色評價氣道上皮下纖維化及氣道壁膠原沉積，組織堿水解法檢測肺組織羥脯氨酸（HYP）含量；運用免疫組織化學(xué)染色法觀察各組小鼠肺組織TGF-β1表達(dá)；計算機(jī)圖像分析軟件測定氣道外、內(nèi)徑比值（Po?Pi），氣道壁厚度和面積（Awt，Aaw）以及TGF-β1免疫組化陽

6、性染色面積與氣道基底膜周徑（Pbm）比值（如Awt?Pbm，TGF-β1?Pbm）等。
　　3．觀察并比較藍(lán)玉簪顆粒及地塞米松干預(yù)后對慢性哮喘小鼠氣道粘液高分泌、氣道上皮杯狀細(xì)胞化生以及Bcl-2表達(dá)的影響。阿爾辛藍(lán)-過碘酸-希夫氏（AB-PAS）染色觀察氣道上皮杯狀細(xì)胞增生、黏液分泌情況；免疫組化染色法觀察各組小鼠氣道上皮細(xì)胞中Bcl-2表達(dá)；計算機(jī)圖象分析軟件測定氣道壁AB-PAS染色，Bcl-2免疫組化染色陽性面積和氣道上皮

7、層（Aep）面積與氣道基底膜周徑（Pbm）比值（如Aep?Pbm，Bcl-2?Pbm）等
　　結(jié)果：1．慢性哮喘模型組小鼠暴露于反復(fù)OVA激發(fā)6周后表現(xiàn)出了典型的氣道炎癥和氣道重建特征，氣道壁及血管壁周圍可見大量炎細(xì)胞浸潤,上皮下纖維化,杯狀細(xì)胞增殖及黏液高分泌,氣道壁明顯增厚。管腔狹窄及支氣管痙攣,炎性評分高。圖像分析結(jié)果顯示其氣道重建形態(tài)學(xué)參數(shù)Aaw?Pbm，Po?Pi及Awt?Pbm等值均較A組明顯增加（P<0.01）。

8、r>　　2．天狼猩紅染色顯示B組小鼠氣道壁及血管壁周圍大量膠原沉積，氣道上皮下纖維化明顯增強(qiáng)；肺組織HYP含量，Po?Pi，Awt?Pbm，Aaw?Pbm以及TGF-β1?Pbm等所有指標(biāo),C組與B組之間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；C組與A，D組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。TGF-β1的表達(dá)與肺組織HYP含量呈顯著正相關(guān)（rs=0.669，P＜0.01）,同時HYP含量與SR?Pbm之間也存在顯著正相關(guān)（rs=0

9、.709，P＜0.01）。
　　3．B組小鼠氣道上皮層增生，氣道黏液分泌顯著增加，氣道壁Bcl-2表達(dá)增強(qiáng)；B組AB-PAS/Pbm，Bcl-2/Pbm等值較C組均顯著增高（P＜0.01）；B組和C組Aep?Pbm值比較差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），C組與D組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；AB-PAS/Pbm與Bcl-2?Pbm顯著正相關(guān)（rs=0.671，P＜0.01），氣道上皮層面積?Pbm與Bcl-2表達(dá)也呈

10、顯著正相關(guān)（rs=0.784，P＜0.001）。
　　結(jié)論：1．OVA腹腔注射致敏2周，OVA霧化激發(fā)6周后，BABL/C小鼠氣道出現(xiàn)了典型的慢性哮喘氣道重建表現(xiàn)。
　　2．藍(lán)玉簪顆粒可以抑制慢性哮喘小鼠氣道炎癥細(xì)胞浸潤，顯著減輕慢性哮喘小鼠氣道炎癥評分；同時還可以顯著降低Po?Pi，Aaw?Pbm，Awt?Pbm等氣道重建相關(guān)的半定量參數(shù)水平。
　　3．藍(lán)玉簪顆?？梢砸种坡韵∈髿獾郎掀は吕w維化及氣道壁膠原沉積，