熒光標記共培養(yǎng)實驗模型的構(gòu)建及其在DNA輻射損傷旁效應檢測的應用.pdf

1、目的：
　　建立研究電離輻射誘導的細胞旁效應 DNA損傷的新的實驗模型，探究γ射線及低劑量的α粒子輻射產(chǎn)生的旁效應DNA雙鏈斷裂（DSBs）和修復的效應特征。
　　方法：
　　構(gòu)建定位于細胞胞漿中的帶有紅色熒光蛋白標簽的pDsRed1-N1-Hspc300重組質(zhì)粒，將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到人皮膚成纖維細胞（HFS）中，篩選出穩(wěn)定表達的HFS-RFP-Hspc300細胞系。將其中一種細胞進行電離輻射（γ射線和低劑量的α粒子），另一種

2、細胞作為輻射旁效應細胞，把兩種細胞混合培養(yǎng)，在不同的時間點收集細胞，利用免疫熒光共聚焦反應，觀察鏡下輻照細胞和旁效應細胞的細胞核內(nèi)γH2AX的foci個數(shù)，從而探究細胞輻射旁效應的DNA損傷和修復情況（主要是DNA的雙鏈斷裂損傷（DSBs））。
　　結(jié)果：
　　1．建立了HFS-RFP-Hspc300細胞和HFS細胞共培養(yǎng)的細胞DNA損傷輻射旁效應研究實驗模型。
　　2．2Gy60Coγ射線照射細胞混合后，直接受照射的

3、HFS細胞與旁效應細胞HFS-RFP細胞γH2AX的數(shù)目變化情況相似，均在照射后30min出現(xiàn)最大值，隨后慢慢降低，照后各時間點與對照組比較均有顯著性差異（P<0.05）。
　　3．不同低劑量的α粒子照射，直接受照細胞 HFS-RFP和旁效應細胞 HFS中的γH2AX簇集點數(shù)隨時間變化的趨勢相似，均在照后1h達到高峰，并且24h 時還是和0h的情況有顯著性差異（P<0.05）。輻照細胞不同時間點的比較，在30min、2h