梔子拮抗內(nèi)毒素活性物質(zhì)京尼平苷的分離制備及其活性評價.pdf

1、構(gòu)成革蘭陰性菌(Gram-negative，G-)外膜的主要成分內(nèi)毒素(lipopolysaccharide，LPS)，是介導(dǎo)細菌膿毒癥的重要病原分子，LPS由O-側(cè)鏈多糖、核心多糖和脂質(zhì)A(LipidA)三部分組成，其中LipidA是LPS的生物學(xué)活性中心。研究證實，LPS在膿毒癥發(fā)生過程中具有重要作用，因此，尋求能拮抗LPS的藥物是預(yù)防和治療G-細菌介導(dǎo)的膿毒癥的重要手段；傳統(tǒng)中草藥在膿毒癥領(lǐng)域的應(yīng)用具有悠久的歷史?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)實踐已證

2、明，許多中藥在體內(nèi)外都具有拮抗內(nèi)毒素的作用。然而由于中藥成份復(fù)雜，在分離純化的過程中缺少有效的活性跟蹤手段，使對具有拮抗內(nèi)毒素活性中藥的深入研究受到限制。本課題利用本實驗室建立的生物傳感器篩選和跟蹤平臺，對與LipidA具有較高結(jié)合活性的梔子進行拮抗內(nèi)毒素活性組分的定向分離，以期獲得具有拮抗內(nèi)毒素活性的單體化合物，為膿毒癥的防治研究提供一種可能的手段。 方法：(1)依托課題組前期已經(jīng)建立的生物傳感器篩選平臺，選擇60種藥物與Li

3、pidA進行結(jié)合活性的檢測，選擇具有高結(jié)合活性的藥物進行研究(2)應(yīng)用與LipidA的結(jié)合活性測定及對膿毒癥模型動物的保護作用作為分離過程中的活性跟蹤手段，采用大孔吸附樹脂、萃取、聚酰胺層析、HPLC等技術(shù)對梔子進行活性組分的定向分離，以期最終得到具有拮抗LPS活性的單體化合物(3)對所得化合物進行HPLC、薄層色譜及熔點測定等技術(shù)分析。(4)活性評價：在體外應(yīng)用鱟試驗觀察化合物對LPS的中和作用，并通過細胞培養(yǎng)觀察化合物對LPS介導(dǎo)的

4、RAW264.7活化的抑制作用；在體內(nèi)觀察其在小鼠體內(nèi)對LPS的中和作用。 結(jié)果：(1)對60種清熱解毒中草藥進行結(jié)合活性測定，篩選出22種與LipidA具有較高結(jié)合活性的中藥，并以其中的梔子作為研究對象(2)從梔子水提取物中定向分離出一個與LipidA具有較高結(jié)合活性的化合物cJ-1(3)經(jīng)HPLC、薄層色譜及熔點測定等技術(shù)分析，初步確定CJ-1為京尼平苷(C17H24O10)(4)活性評價：京尼平苷在體外對LPS具有較好的中