山羊C-KIT和SCF基因在皮膚中的表達及與毛色關(guān)系研究.pdf

1、本研究旨在探索c-KIT基因及SCF基因在不同毛色山羊皮膚中的表達及與成熟黑素細胞數(shù)量關(guān)系，并篩選出與山羊毛色相關(guān)的c-KIT基因及其配體SCF基因的SNPs標記，以期對毛色性狀的分子育種實踐提供理論基礎(chǔ)。
　　研究中對SCF基因mRNA存在的不同剪接類型進行探究，發(fā)現(xiàn)存在可溶型(KC794711.1)，跨膜型(KC794712.1)和類跨膜型(KC794713.1)三種剪接形式。選擇TYR基因作為成熟黑素細胞的標志分子，利用實時

2、熒光定量PCR技術(shù)對黑色和白色山羊皮膚組織中c-KIT、SCF以及TYR等毛色相關(guān)基因表達量進行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn):黑色被毛山羊皮膚組織中TYR基因mRNA表達量是白色被毛山羊的8.280倍;c-KIT基因mRNA表達量是白色被毛山羊的1.255倍;可溶性SCF基因mRNA表達量是白色被毛山羊的0.267倍;跨膜型SCF基因mRNA表達量是白色被毛山羊的0.874倍;類跨膜型SCF基因mRNA表達量是白色被毛山羊的0.103倍?？扇苄許CF

3、和類跨膜型SCF基因mRNA表達量之和在黑白山羊個體間差異顯著(P＜0.05)，可能與黑白毛色的形成有關(guān)。
　　本研究利用免疫組織化學(xué)(IHC)方法對黑色和白色表型山羊皮膚組織中c-KIT的表達分布進行研究，結(jié)果顯示:在山羊皮膚組織中，c-KIT陽性區(qū)域主要分布于表皮、毛囊漏斗部以及毛囊內(nèi)外根鞘;黑色被毛山羊皮膚組織中c-KIT蛋白表達分布與白色被毛山羊組織無明顯差異，可能不是本研究中黑白毛色的形成的關(guān)鍵因素。
　　本研究利

4、用Ensembl數(shù)據(jù)庫中牛的全基因組序列作為模板設(shè)計引物，以四個品種共41只山羊基因組作為模板，通過PCR-測序技術(shù)獲得了山羊c-KIT基因外顯子1，2，5，6，7，8，14，15，16，17，18，19，20，21序列和SCF基因外顯子1,3，4，6，9及每個外顯子兩側(cè)的部分內(nèi)含子序列。通過比對分析這些序列，在c-KIT基因上共發(fā)現(xiàn)32個SNP位點，其中g(shù).68332351G＞A，g.68346732T＞G，g.68355062C＞T

5、,g.68359335G＞A4個位點為cSNPs。其中3個為錯義突變，1個為同義突變。在本研究中，g.68346732G只存在于被毛為淺色的個體中，g.68359156T只存在于被毛呈深色的個體中，g.68332351A只存在于南江黃羊快長系山羊個體中。在SCF基因上共發(fā)現(xiàn)19個SNPs和g.17658037insertA，g.17621420insertT,g.17621283insertGA3個InDels，其中1個位點為cSNPs

6、，并且該突變位于外顯子6，可能影響該基因產(chǎn)物可溶型SCF的正常成熟。
　　對c-KIT基因上的4個cSNPs進行分析，發(fā)現(xiàn)單倍型GTAT和ATAC只存在于深被毛顏色的個體，而單倍型GGAC只存在于淺色個體中。對c-KIT基因上的全部SNPs進行分析，獲得了20個c-KIT基因單倍型，分化系數(shù)為0.892，其中15個只存在于單一的種群內(nèi);其中遼寧絨山羊c-KIT基因Tajima檢驗結(jié)果為顯著，D值為2.414，該種群中可能存在對c-