MP1基因在遼寧絨山羊皮膚的表達研究.pdf

1、分類號：密級：學(xué)校代碼：學(xué)號：10165201211001079遣享師耗火擎碩士學(xué)位論文⑦MPl基因在遼寧絨山羊皮膚的表達研究作者姓名：學(xué)科、專業(yè)：研究方向：導(dǎo)師姓名：張麗麗動物學(xué)動物遺傳育種金梅教授2015年3月遼寧師范大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要遼寧絨山羊是我國特有的品種，并且是禁止基因外流的寶貴資源，其羊絨產(chǎn)量居全國首位，因此，研究與羊絨相關(guān)基因的功能就更具實際生產(chǎn)意義。前期，我們實驗室通過建庫、測通獲得了遼寧絨山羊的新基因MPl(MEK

2、Partner1)的全長序列，首先對MPl基因進行生物信息學(xué)分析，檢測其核酸及氨基酸的同源性，建立進化樹等。然后通過RTPCR檢測MPl基因在各組織中的表達，再利用qPCR方法檢測其在毛囊生長的不同時期的初、次級毛囊中的表達含量，最后對絨山羊興盛期皮膚進行原位雜交并對其進行表達位點分析。為進一步研究MPl基因是否與羊絨細度之間存在某種關(guān)系，利用本實驗室已有的Noggin基因RNA干擾的慢病毒，感染遼寧絨山羊皮膚細胞后，再利用qPCR檢測

3、其對MPl基因表達的影響，為培育出具有優(yōu)良經(jīng)濟性狀的絨山羊提供一定的分子理論基礎(chǔ)。結(jié)果如下：(1)MPl基因編碼的蛋白質(zhì)包含124個氨基酸，分子量為1364KD，是一個疏水性蛋白。MPl含有a螺旋結(jié)構(gòu)(2581％)、延伸鏈結(jié)構(gòu)(3387％)和無規(guī)卷曲(4032％)。無跨膜結(jié)構(gòu)域，無信號肽。MPI的氨基酸序列包含一個保守的MAPKKIInt結(jié)構(gòu)域，含有有3個可能成為磷酸化位點的Ser。RTPCR檢測結(jié)果顯示：僅在皮膚、心臟中MPl基因有表

4、達，而在肝、腎、肺、脾中未發(fā)現(xiàn)其表達。qPCR檢測毛囊在興盛期時，MPl基因在次級毛囊的表達量為初級毛囊的165倍，退行期MPl基因在次級毛囊的表達量為初級毛囊的325倍。原位雜交分析發(fā)現(xiàn)：MPl在內(nèi)根鞘上有明顯的表達，在毛干、外根鞘以及毛囊乳突中無表達。(2)成功構(gòu)建出Noggin基因RNAi的慢病毒載體，Noggin基因被干擾后，qPCR檢測發(fā)現(xiàn)MPl基因起負調(diào)控作用，MPl基因的相對表達量出現(xiàn)上調(diào)的趨勢。由以上結(jié)果可以得出以下結(jié)論