濟寧青山羊皮膚毛囊體外培養(yǎng)和基因表達差異研究.pdf

1、濟寧青山羊是具有獨特毛色和花形的羔皮用山羊品種，其主要產(chǎn)品是猾子皮、板皮和山羊絨。羔羊生后1-3天內屠宰后得到的猾子皮具有天然的色彩和花紋，毛色品質好，光潤，皮板輕巧而美觀。猾子皮所制的翻毛皮衣和帽領等在國際市場上極為暢銷，享有盛譽。本研究主要采用組織學技術和差異顯示反轉錄PCR(DDRT-PCR)等分子細胞生物學技術，對濟寧青山羊的皮膚毛囊組織結構和基因表達差異進行了研究，研究結果有助于揭示動物毛囊器官的生長發(fā)育規(guī)律；并為揭示濟寧青山

2、羊猾子皮花紋品質的分子遺傳機理奠定基礎。 本文首先以組織學方法，研究了濟寧青山羊猾子皮和成年羊皮膚毛囊的組織學結構。結果表明：猾子皮的毛囊與表皮呈45度傾斜，密度較稀。成年羊皮膚初級毛囊的毛球較大，毛囊較粗長，具有汗腺、皮脂腺、豎毛肌等附屬結構，毛干有髓質：次級毛囊的毛球較小，皮脂腺不發(fā)達或缺如，毛干沒有髓質。 比較了揉后小猾皮和大猾皮的品質和組織學結構特點。結果表明：小猾皮干皮重平均為88.75±11-33，比大猾皮(

3、出生30-60日齡)的皮板(重159.83±10.72)輕?。河谢娣e比例為67.84±2.97，明顯高于大猾皮(60.00±7.39)，且優(yōu)等的波浪花所占比例較高；單位皮重面積產(chǎn)率(14.83±1.49)亦高于大猾皮(12.98±0.61)。但是，小猾皮的抗張強度、撕裂強度、崩裂強度均不及大猾皮。大猾皮與小猾皮皮厚的差異極顯著(P＜0.01)；大猾皮各個部位皮厚的部位差差異不顯著(P＞0.05)：而小猾皮各個部位皮厚的部位差明顯大于大

4、猾皮，且差異顯著(P＜0.05)。 濟寧青山羊是生產(chǎn)猾子皮的一個專用品種，今后應加強該品種的選育和改良，增大羊的體型，提高猾皮總面積、波浪花的比例和皮板的物理機械指標，以便獲得品質更好的猾子皮，進一步提高經(jīng)濟效益。 進一步采用差異顯示反轉錄PCR技術，研究了濟寧青山羊胎兒期、小猾皮和大猾皮皮膚組織的基因表達差異，結果表明：8種引物組合在3個年齡段的青山羊皮膚組織中共擴增出482條清晰可辯的條帶，其中，在三個發(fā)育階段的皮膚

5、組織中未發(fā)現(xiàn)“有或無”的差異表達條帶；但發(fā)現(xiàn)了99條表達“強或弱”的差異表達片段，占總條帶數(shù)的20.54％。若進一步對這些差異表達條帶進行回收、雜交驗證和克隆測序，則有望得到與毛囊生長發(fā)育相關的差異表達基因。 采用三因子三水平的拉丁方正交試驗設計(L9(34))方法，對比研究了無血清的WilliamsE培養(yǎng)基、無血清的DMEM培養(yǎng)基和添加10％FCS(胎牛血清)的DMEM培養(yǎng)基，及其在三種培養(yǎng)基中分別添加0、2ng/mL和10n

6、g/mL三種不同濃度的血管內皮細胞生長因子(VEGF)和表皮細胞生長因子(EGF)時對成年羊毛囊體外培養(yǎng)的影響。將山羊的單根毛囊完整地從皮膚組織中分離出來，同時平行培養(yǎng)在9種培養(yǎng)基中，借助于倒置顯微鏡和目鏡測微尺隨時不斷地觀察毛囊生長的形態(tài)變化和測量毛根的長度。結果發(fā)現(xiàn)：山羊游離毛囊在9種培養(yǎng)基中均能很好地生長；但以無血清的培養(yǎng)基和在WilliamsE培養(yǎng)基的效果最好；分別和同時添加2％-10％的VEGF和EGF時可加快毛囊的生長；添加