三七醇提物和堿性電解水抗氧化作用的研究.pdf

1、目的：
　　越來越多的研究證明活性氧與高血壓、糖尿病、白內(nèi)障等疾病有密切的關(guān)系，大量的研究也發(fā)現(xiàn)一定抗氧化物質(zhì)的使用可以減輕疾病癥狀或者有潛在的積極作用，本研究旨在研究三七醇提物與堿性電解水對實驗性氧化損傷的保護作用。
　　方法:
　　1．建立體外氧化損傷模型研究不同濃度三七醇提物和堿性電解水自由基生成的抑制作用。采用不同的微粒體脂質(zhì)過氧化損傷模型和化學(xué)發(fā)光模型，加入三七醇提物與堿性電解水干預(yù)后檢測反應(yīng)體系中脂質(zhì)過氧產(chǎn)

2、物的量，評價三七醇提物和堿性電解水體外清除自由基作用的劑量-效應(yīng)關(guān)系。
　　2．細胞氧化應(yīng)激模型的建立分別以QZG細胞（人肝組織細胞系）和HepG2細胞（人肝腫瘤細胞系）作為研究載體，使用不同pH的電解水配置培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞，分為陰性對照組、陽性對照和不同pH堿性電解水組，利用叔丁基過氧化氫（tBHP）造成細胞氧化應(yīng)激損傷，研究堿性電解水對細胞氧化應(yīng)激損傷的保護作用。
　　3．建立大鼠照射氧化應(yīng)激損傷模型、D-半乳糖和乙醇氧化

3、應(yīng)激損傷模型研究三七醇提物或堿性電解水對實驗動物的抗氧化作用。
　?。?）照射氧化應(yīng)激動物模型的建立：40只SD大鼠共分成5組，分別是陰性對照組（NC）、陽性對照組（PC）、三七醇提物低（50mg/kg·d,L）、中（225mg/kg·d,M）和高（450mg/kg·d,H）劑量組，每組8只。除陰性對照組外實驗動物全部給予60Co-γ射線累計6Gy、共計照射2次的照射劑量，照射前3天和照射后7天給予三七醇提物灌胃，陽性對照組和陰性

4、對照組灌胃相同劑量的生理鹽水。
　?。?）D-半乳糖氧化應(yīng)激模型的建立：32只大鼠共分成4組，分別是自來水組（W）、電解水組（ERW）、D-半乳糖組(W-D)、D-半乳糖電解水組(ERW-D)，每組8只。自來水組飲用常規(guī)水，電解水組飲用pH為8.4的電解水2個月，模型組腹腔注射D-半乳糖100mg/kg.d，對照組注射相同劑量的生理鹽水，總共4個月。
　?。?）酒精氧化應(yīng)激模型的建立：32只大鼠共分成4組，分別是自來水組（W

5、）、酒精組（W-乙）、酒精電解水組（ERW-乙）、電解水組（ERW），每組8只。自來水組飲用常規(guī)水，電解水組飲用pH為8.4的電解水4個月，模型組給予50％酒精（0.76ml/100g·d）灌胃3天，對照組給予相同劑量的生理鹽水。
　　處理結(jié)束后大鼠禁食12h，2％戊巴比妥鈉麻醉取血清和肝臟,檢測相應(yīng)的氧化應(yīng)激指標(biāo)和抗氧化指標(biāo)，以及相關(guān)分子的蛋白表達。
　　結(jié)果:
　　1．三七醇提物抗氧化作用研究
　　化學(xué)發(fā)光的

6、實驗結(jié)果顯示，三七醇提物對化學(xué)發(fā)光反應(yīng)存在明顯的劑量依賴性抑制作用，證明三七醇提物可直接清除OH自由基。CC14/NADP、CHP和Vc/Fe2+LPO模型的實驗結(jié)果顯示，不同濃度的三七醇提物均能顯著地抑制MDA的生成，且存在一定的劑量-效應(yīng)關(guān)系。動物實驗結(jié)果顯示60Co-γ照射后，肝組織和血清中CAT活性升高（P<0.05），SOD活性、GSH含量均降低（P<0.05），肝組織中GSSG、MDA含量增加（P<0.05），MDA血清中變

7、化不明顯，給予不同劑量三七醇提物后肝組織和血清中CAT、SOD活性和GSH含量均有不同程度的升高（P<0.05）；肝組織MDA和GSSG含量呈下降趨勢；血清中MDA含量下降，且以高劑量組降低最明顯（P<0.05）。
　　2．堿性電解水抗氧化作用研究
　　體外模型實驗發(fā)現(xiàn)，在代表不同自由基反映的微粒體LPO模型中，電解水pH值不同，對自由基反應(yīng)的作用不同，相同pH值的電解水對不同自由基激發(fā)模型其作用也不盡相同。細胞實驗結(jié)果顯示

8、，給予tBHP刺激后，QZG細胞中CAT、Nrf2、PRX1分子表達變化不明顯，T-SOD和HO-1蛋白表達降低（P<0.05）；HepG2細胞中CAT、GR、GCS、PRX3、HO-1表達增加（P<0.05）；給予不同 pH電解水培養(yǎng)后的細胞，這些抗氧化分子的表達均增加，以pH為8.4組增加的種類和數(shù)量為最多，其他pH電解水增加較少或者變化不明顯。
　　動物實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，單純給予D-半乳糖刺激后，大鼠血清和肝組織中MDA含量增加

9、（P<0.05），血清中CAT、Gpx、GST的活性和T-AOC增高（P<0.05），SOD變化不明顯；肝組織中Gpx活性降低（P<0.05），其它分子活性變化不明顯。經(jīng)過兩個月自由飲用電解水后的大鼠血清中MDA含量較陽性對照無明顯改變，肝組織降低（P<0.05）；飲用電解水后的大鼠給予D-半乳糖刺激后，血清和肝臟中的MDA含量均增加（P<0.05）。單純給予電解水血清中CAT、Gpx活性增高（P<0.05），給予電解水的實驗大鼠刺激后

10、，血清中SOD活性升高（P<0.05），其他血清和肝組織中抗氧化能力與陽性對照組相比降低或者無變化。酒精刺激后，大鼠血清中MDA含量明顯高于對照組（P<0.05），同時引起 T-AOC和CAT、GST、Gpx等抗氧化酶活性應(yīng)激升高（P<0.05）；肝組織中MDA升高（P<0.05），但無統(tǒng)計學(xué)意義， SOD和Gpx活性較陰性對照組降低（P<0.05），其它抗氧化能力變化不明顯。給予電解水后，血清中MDA含量較陰性對照高，肝組織較陰性對照

11、組低，飲用電解水大鼠給予酒精刺激后，肝組織中MDA含量升高（P<0.05），血清中T-AOC、Gpx也高于陰性對照組，肝組織中則降低（P<0.05）。
　　結(jié)論:
　　1．三七醇提物有一定的清除自由基，抑制脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的生成等抗氧化作用，且抗氧化作用在一定劑量范圍內(nèi)呈劑量-效應(yīng)關(guān)系。
　　2．不同pH堿性電解水抗氧化保護作用不同，弱堿性的作用較強，偏大或者偏小都有促進脂質(zhì)過氧化作用。
　　3．飲用堿性電解水能提