AdLacZ基因修飾的山羊耳軟骨細(xì)胞復(fù)合F127構(gòu)建組織工程化軟骨的實驗研究.pdf

1、目的：應(yīng)用AdLacZ基因修飾體外培養(yǎng)的山羊耳軟骨細(xì)胞，與F127 pluronic支架材料復(fù)合，并植入裸鼠皮下，觀察裸鼠皮下軟骨形成的過程，判斷軟骨的來源，為進(jìn)一步應(yīng)用軟骨分化因子基因修飾重建軟骨的研究提供參數(shù)。 方法：實驗于2004年11月-2006年12月期間在上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院完成，實驗動物取體質(zhì)量26～30 kg健康雄性山羊一只，6周齡體質(zhì)量20克BALB/c裸鼠24只，隨機(jī)分成4組，每組6只。體外培養(yǎng)

2、山羊耳軟骨細(xì)胞，轉(zhuǎn)染AdLacZ基因，檢測基因轉(zhuǎn)染效率。將基因轉(zhuǎn)染的細(xì)胞與可吸收生物材料F127 Pluronic混合形成細(xì)胞-生物材料復(fù)合物，注射到其中一組裸鼠皮下作為實驗組，每只裸鼠背部皮下分別接種2個點。同樣設(shè)計，分別以未轉(zhuǎn)染基因的軟骨細(xì)胞-材料復(fù)合物，軟骨細(xì)胞，和F127支架材料注射到剩下的3組裸鼠皮下。裸鼠背部皮下均接種2個點，所有裸鼠術(shù)后第2、4周分別在接種點取材，標(biāo)本行蘇木精-伊紅染色、臺盼藍(lán)染色，并對4周標(biāo)本行X-gal

3、染色，Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)檢測。 結(jié)果：所有動物實驗均進(jìn)入結(jié)果分析，無脫落。50 pfu/細(xì)胞可以獲得80％的轉(zhuǎn)染效率，第2周時LacZ組細(xì)胞-材料復(fù)合物形成了不成熟的軟骨樣組織，第4周LacZ組中央部位出現(xiàn)少量稍成熟的軟骨，部分細(xì)胞有Ⅱ型膠原陽性表達(dá)。冰凍切片X-gal染色提示細(xì)胞來自于植入的軟骨-材料復(fù)合物。未轉(zhuǎn)基因的軟骨細(xì)胞-材料復(fù)合物組，其組織學(xué)及Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)表現(xiàn)與LacZ組沒有明顯差別，而X-gal染色為陰性。