脈絡寧對老年性癡呆模型大鼠腦組織Sirt1基因表達的影響.pdf

1、目的:以雙因素處理大鼠(去卵巢同時注射D-半乳糖)模擬早期老年性癡呆模型,觀察中藥復方脈絡寧和謝海洲方,西藥維生素(C+E)和阿托伐他汀藥物干預對大鼠腦組織Sirtl基因表達的影響。
　　 方法：
　　 1：動物分組及取材:
　　 選用4月齡雌性SD大鼠48只,隨機分為2組:假手術組(Sham組)、去卵巢組(OVX組),其中Sham組8只、OVX組40只。Sham組為雙側去除少量卵巢上脂肪組織,OVX組為去除雙側

2、卵巢。手術后2周Sham組給予生理鹽水0.5ml/d,腹腔注射;OVX組給予D-半乳糖20mg·0.5ml/d,腹腔注射。注射6周后將OVX組再次隨機分為5組:脈絡寧組(ODM),謝海洲方組(ODZ),V.C+V.E組(ODV),阿托伐他汀組(ODA)及病理對照組(OD),每組8只。各組均灌胃4周,灌胃劑量如下:ODM組脈絡寧注射液1.8ml/Kg.d,ODZ組謝海洲方16.83 g/kg.d,ODV組V.C45mg/Kg.d,V.E2

3、7mg/Kg.d,ODA組7.2mg/Kg·d,Sham組及OD組分別灌服蒸餾水1.5ml/Kg.d。灌胃過程中OVX組及Sham組繼續(xù)分別給予D-半乳糖及生理鹽水注射。手術后常規(guī)喂養(yǎng)12周后處死。
　　 2：行為學測試
　　 注射D-半乳糖四周后,用Morris水迷宮對所有大鼠進行訓練,每天4次,每次間隔5分鐘,共四天,做為學習記憶訓練。注射D-半乳糖六周后進行Morris水迷宮測試,一天內測試4次,每次間隔5分鐘,共

4、測試一天。以后三次逃避潛伏期(escape latency)的平均值作為評價大鼠記憶能力的指標。動物處死前一天,同樣條件水迷宮1天,方法同上,記錄大鼠逃避潛伏期的平均值,作為評價大鼠空間記憶能力的指標。
　　 3：組織標本的獲取及指標測定
　　 3.1：組織標本的獲取麻醉大鼠,開顱并迅速分離顳葉右側皮層置于液氮中,于-80℃低溫冰箱保存,用于組織總RNA及總蛋白的提取。
　　 3.2： Sirtl基因mRNA表達

5、的測定用Trizol法提取總RNA。以GAPDH做內參,RT-PCR法測定顳葉右側腦組織Sirtl基因在mRNA水平的相對表達量。
　　 3.3： Sirtl蛋白表達的測定提取顳葉右側皮層腦組織總蛋白并用Lowry法測定蛋白含量,以每毫升樣品中的毫克蛋白量(mg/ml)表示。以GAPDH為內參照,用western-blotting法分別檢測各組Sirtl的相對表達量。
　　 4：數(shù)據(jù)處理
　　 所有數(shù)據(jù)均采用均數(shù)

6、間的比較,應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理,所有數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標準差((x-)±s)表示,多組間均值的比較用單因素方差分析。經(jīng)檢驗各組方差齊,進一步組間比較選用SNK多重比較檢驗,α=0.05。經(jīng)檢驗方差不齊,進一步組間比較選用Dunnett T3多重比較檢驗,α=0.05。
　　 結果：
　　 1：學習記憶能力的變化
　　 Sham組逃避潛伏期為8.7±4.1,OVX+D-gal組逃避潛伏期為15.2±8.1。

7、與Sham組相比,OVX+D-gal組逃避潛伏期明顯延長(P＜0.05);給藥后,ODM+ODZ+ODV+ODA組逃避潛伏期為9.1±6.5,OD組逃避潛伏期為16.7±12.3?？梢?與OD組相比,ODM+ODZ+ODV+ODA組逃避潛伏期明顯縮短,差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 2：腦組織Sirtl mRNA水平的變化
　　 OD組的Sirtl mRNA的相對表達量為0.464±0.063,Sham組的S

8、irtlmRNA的相對表達量為0.624±0.030,與Sham組相比,OD組的SirtlmRNA的相對表達量明顯降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);ODM組的Sirtl mRNA的相對表達量為0.968±0.127、0DZ組的Sirtl mRNA的相對表達量為0.859±0.119,ODV組的Sirtl mRNA的相對表達量為0.790±0.076,ODA組的Sirtl mRNA相對表達量為0.603±0.091。與OD組相比,

9、ODM組、ODZ組,ODV組和ODA組的Sirtl mRNA相對表達量均有不同程度的升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 3：腦組織Sirtl蛋白相對含量的變化
　　 OD組的Sirtl相對表達量為0.581±0.199,Sham組Sirtl相對表達量為0.906±0.085,與Sham組相比,OD組Sirtl相對表達量明顯降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)ODM組的Sirtl的相對表達量為2.023±

10、0.288、ODZ組的Sirtl的相對表達量為1.818±0.287,ODV組的Sirtl的相對表達量為1.605±0.225,ODA組的Sirtl相對表達量為1.033±0.091。與OD組相比,ODM組、ODZ組、ODV組、ODA組的Sirtl相對表達量均有不同程度的增加,差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 結論：
　　 1：本模型大鼠顳葉右側皮層目標蛋白Sirtl mRNA和蛋白質表達水平均降低。