2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、為了探討以MIF為靶向進(jìn)行炎癥顯像的可行性,本研究所自行制備了放射性碘化標(biāo)記的抗MIF單克隆抗體(anti-MIF McAb)及其對照抗體IgG,并在金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和醫(yī)用松節(jié)油誘導(dǎo)建立的三種小鼠炎癥模型體內(nèi)進(jìn)行了生物學(xué)分布和顯像的實(shí)驗(yàn)研究。研究內(nèi)容分為以下三部分: 第一部分:放射性碘化標(biāo)記anti-MIF McAb和IgG的制備及生物學(xué)活性鑒定 目的:采用固相Iodogen法碘化標(biāo)記anti-MIF McAb和

2、IgG,對其標(biāo)記率、放射化學(xué)純度、穩(wěn)定性及生物學(xué)活性進(jìn)行系列研究,為下一步的研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法:采用固相Iodogen法,125I和/或125I分別碘化標(biāo)記了anti-MIF McAb和IgG。檢測放射性碘化標(biāo)記anti-MIF McAb及其對照抗體在室溫儲存不同時(shí)間后的放射化學(xué)純度,觀察其在體外的穩(wěn)定性。以酶聯(lián)免疫吸附法檢測放射性碘化標(biāo)記anti-MIF McAb的免疫學(xué)活性。 結(jié)果: 1.125I-an

3、ti-MIF McAb的標(biāo)記率為82.35%,放化純?yōu)?8.25%,放射性比活度為29.56 GBq/μmol。 2.131I-anti MIF McAb的標(biāo)記率為87.25%,放化純?yōu)?7.10%,放射性比活度為29.56 GBq/μmol。 3.131I-IgG的標(biāo)記率為81.56%,放化純?yōu)?7.17%,放射性比活度為30.12GBq/μmol。 結(jié)論:三種標(biāo)記物的穩(wěn)定性和免疫活性良好,達(dá)到了用于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)

4、研究的要求標(biāo)準(zhǔn)。 第二部分:125I-anti-MIF McAb在小鼠炎癥模型體內(nèi)的生物學(xué)分布研究 目的:建立金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和醫(yī)用松節(jié)油誘導(dǎo)的三種小鼠炎癥模型,觀察125I-anti-MIF McAb在三種小鼠炎癥模型的體內(nèi)生物學(xué)分布,同時(shí)利用磷屏進(jìn)行放射自顯影炎癥顯像研究。 方法: 1.建立小鼠炎癥模型:BALB/c小鼠60只隨機(jī)分為3組,每組20只。利用大腸桿菌、金葡萄球菌、松節(jié)油誘導(dǎo)建立小

5、鼠炎癥模型。 2.125I-anti-MIF McAb在炎癥模型小鼠的體內(nèi)分布:對每種炎癥模型的小鼠采用腹腔注射法注射125I-anti-MIF McAb 0.2ml約3.7MBq。在完成注射后第30min、4h、24h、48h和72h,從3組炎癥小鼠中隨機(jī)各取出3只脫臼處死,解剖取出全部炎癥組織、心、肝、脾、肺、腎、骨、甲狀腺、胸腺和左側(cè)對照肌肉組織的樣本,稱重,利用γ計(jì)數(shù)器測定各器官或組織的放射性計(jì)數(shù)(cpm),并計(jì)算其平均

6、cpm/g;測定125I-antiMIF McAb注入量標(biāo)準(zhǔn)源的放射性計(jì)數(shù),計(jì)算各器官或組織內(nèi)放射性占標(biāo)準(zhǔn)源放射性的百分比(%ID)、T/NT。 3.金黃色葡萄球菌組、大腸桿菌組、松節(jié)油組炎癥模型小鼠各5只尾靜脈注射3.7MBq 0.2mL125I-anti-MIF McAb,在注射后24h、48h、72h分別用0.06%戊巴比妥0.2ml麻醉炎癥模型小鼠,俯臥在磷屏上進(jìn)行放射自顯影。 4.以RT-PCR、免疫組化法檢測

7、小鼠炎癥模型炎癥組織MIF基因及蛋白表達(dá)水平的變化,以證實(shí)放射性碘化標(biāo)記的anti-MIF McAb在炎癥部位的濃聚是由局部高表達(dá)的MIF基因及蛋白引起的。 結(jié)果: 1.三種小鼠炎癥模型在注射125I-anti-MIFMcAb后30min,血液和腎、肝、脾等器官組織內(nèi)的放射性計(jì)數(shù)均迅速增高,持續(xù)增高至4h后迅速降低,24h以后下降緩慢。在各器官組織中以肌肉和股骨內(nèi)的放射性計(jì)數(shù)在各時(shí)間點(diǎn)為最低。 2.炎癥部位的放射

8、性攝取在注射125I-anti-MIF McAb 4h后開始明顯增加,金葡菌組炎癥部位24h的攝取最高,48h炎癥部位攝取迅速跌落形成峰狀;而松節(jié)油組4h炎癥部位攝取即達(dá)較高值并持續(xù)至48h,72h迅速跌落;大腸桿菌組從4h開始炎癥部位的放射性積聚一直持續(xù)緩慢增加,但其攝取均低于金葡菌組和松節(jié)油組。各時(shí)間點(diǎn)T/NT比值隨時(shí)間的增加而逐漸升高:金葡菌組在30min即可升至4,24h金葡菌組、大腸桿菌組和松節(jié)油組分別為9.65、3.46和5

9、.37,以后T/NT比值繼續(xù)升高,48h三組小鼠炎癥模型的T/NT比值均達(dá)到了7以上。炎癥部位的放射自顯影結(jié)果與體內(nèi)生物學(xué)分布觀察到的T/NT變化相一致。 3.RT-PCR、免疫組化結(jié)果表明:小鼠金葡菌炎癥組織中MIF mRNA、MIF蛋白高表達(dá),與炎癥顯像濃聚程度正相關(guān)。 結(jié)論:125I-anti-MIF McAb能夠靶向性聚集于炎癥病灶,且在靶組織中清除緩慢,放射自顯影與體內(nèi)生物學(xué)分布觀察到的T/NT變化相一致。

10、 第三部分:131I-anti-MIF McAb和131I-IgG在小鼠炎癥模型體內(nèi)生物學(xué)分布的對比研究 目的:建立金黃色葡萄球菌小鼠炎癥模型,對比研究131I-anti-MIF McAb和131I-IgG在小鼠炎癥模型體內(nèi)的生物學(xué)分布及磷屏顯像特點(diǎn) 方法: 1.建立BALB/c小鼠金葡菌炎癥模型。 2.40只模型鼠隨機(jī)分為兩組,采用尾靜脈注射法,每只模型小鼠注射131I-anti-MIF McAb或

11、131I-IgG各0.2ml約3.7 MBq。 3.在注射后24h、48h和72h,從兩組炎癥小鼠模型中隨機(jī)各取出5只脫臼處死,解剖取出全部炎癥組織、心、肝、脾、肺、腎、骨、甲狀腺、胸腺和左側(cè)對照肌肉組織的樣本,稱重,利用γ單道能譜儀測定各器官或組織的放射性計(jì)數(shù)(cpm),并計(jì)算其平均cpm/g;測定131I-IgG注入量標(biāo)準(zhǔn)源的放射性計(jì)數(shù),計(jì)算各器官或組織內(nèi)放射性占標(biāo)準(zhǔn)源放射性的百分比(%ID)。 4.從兩組炎癥小鼠模

12、型中隨機(jī)各取出5只,分別在24h、48h、72h用0.06%戊巴比妥0.2ml麻醉,進(jìn)行磷屏自顯影顯像。 結(jié)果: 1.131I-anti-MIF McAb和131I-IgG在炎癥模型鼠體內(nèi)的分布各自有明顯不同的特點(diǎn)。131I-IgG組血液放射性明顯高于131I-anti-MIF McAb,且消減緩慢,而131I-anti-MIF McAb組肝、脾及腎的放射性在各時(shí)相均較131I-IgG組高,差異有顯著性(p<0.05)。

13、 2.注射131I-anti-MIF McAb和131I-IgG 24h后,炎癥部位均有較多的放射性濃聚。131I-anti-MIF McAb的炎癥部位積聚量在注射后24h、48h、72h均明顯高于131I-IgG組(p<0.05),表明131I-anti-MIF-McAb在炎癥部位有比131I-IgG更特異的濃聚。 3.炎癥部位的放射自顯影顯像結(jié)果與體內(nèi)生物學(xué)分布觀察到的生物學(xué)分布變化相一致。 結(jié)論:與131I

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