蘭茵鳳揚化濁解毒方對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠ITF、EGF及MAPK-ERK表達的實驗研究.pdf

1、目的:本研究通過觀察蘭茵鳳揚化濁解毒方對潰瘍性結(jié)腸炎（Ulcerative Colitis，UC）大鼠模型一般狀況、疾病活動指數(shù)(DiseaseActivity Index，DAI)評分、病理組織學以及結(jié)腸組織中腸三葉因子(Intestinal Trefoil Factor，ITF)、表皮生長因子(Epidermal Growth Factor，EGF)及促分裂原活化蛋白激酶(Mitogen-Activated Protein Kina

2、se，MAPK)信號轉(zhuǎn)導通路中的關鍵蛋白細胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(Extracellular RegulatedProtein Kinase，ERK)表達的影響，探討該方治療UC大鼠的作用機理，進一步為本方在臨床應用中提供理論和實驗基礎。
　　方法:60只健康雄性大鼠（體重200g-250g），適應性喂養(yǎng)7天后，隨機分成6組:正常組(NG)，模型組(MG)，蘭茵鳳揚化濁解毒方高、中、低劑量組(HDG、MDG、LDG)，柳氮磺吡啶組(SA

3、SP)，每組大鼠10只。除NG之外，其它的五組UC大鼠模型的制備均采用2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇溶液灌腸法，造模后的第3天，NG大鼠予正常喂養(yǎng)，予MG大鼠生理鹽水灌胃，SASP大鼠采用柳氮磺吡啶混懸液灌胃，余各中藥治療組應用相應的藥物灌胃。連續(xù)治療14天，觀察每組大鼠每天的精神狀態(tài)、飲食飲水、活動、體重、糞便性狀等情況。治療結(jié)束之后，各組大鼠均禁食不禁水24小時，分別稱重記錄，將大鼠處死后，觀察結(jié)腸黏膜的大體觀以及組織病

4、理學的改變，并用逆轉(zhuǎn)錄PCR(Reversetranscriptase-PCR，RT-PCR)法測定ITF、EGF、MAPK/ERK的表達。
　　結(jié)果:
　　1、大鼠的一般情況觀察
　　NG大鼠精神狀態(tài)佳，被毛光澤，飲食與進水均正常，活動量正常，大便呈顆粒狀，無黏液及膿血，體重逐漸增加。其余5組的大鼠造模后逐漸出現(xiàn)精神萎靡，被毛凌亂且無光澤，嗜蜷臥，喜扎堆，進食量以及活動量明顯減少，大便稀溏甚至出現(xiàn)膿血便，墊料污穢。M

5、G大鼠上述癥狀隨實驗天數(shù)的增加逐漸加重，甚者肉眼可見肛周血便，大鼠的體重不同程度減輕。4組治療組的大鼠經(jīng)過藥物治療后，其精神情況、皮毛的色澤、活動量、體質(zhì)量等狀況均較前好轉(zhuǎn)。HDG大鼠的好轉(zhuǎn)最為顯著，一般狀況與NG接近;SASP與MDG一般狀況比較無明顯差別，次于HDG組，但仍高于LDG; LDG大鼠的一般狀況稍好于MG。
　　2、DAI評分
　　HDG(0.37±0.35)、MDG(0.81±0.29)、LDG(1.56±

6、0.41)、SASP（0.78±0.29）與MG（2.46±0.43）比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，HDG與SASP、MDG、LDG比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，SASP與MDG比較，差異沒有統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，SASP與LDG比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　3、結(jié)腸粘膜的肉眼觀察和組織病理學觀察
　　MG結(jié)腸粘膜肉眼觀察結(jié)果最差，可見大而深的潰瘍，HDG與NG接近，MDG與SASP

7、較優(yōu)，且MDG優(yōu)于SASP，LDG次于其余3組治療組，可見散在糜爛、潰瘍，但優(yōu)于MG。
　　組織與病理學觀察:NG大鼠粘膜光滑，色澤可;MG大鼠粘膜腺體破壞，可見大量炎性細胞彌漫浸潤，粘膜充血、水腫，有明顯的潰瘍形成;LDG組粘膜破壞情況次于MG; HDG接近NG，結(jié)構基本完整;MDG次于HDG，SASP介于HDG和MDG之間，且優(yōu)于LDG。
　　4、結(jié)腸組織ITF表達比較
　　用ITF和GAPDH灰度值相比的值為IT

8、FmRNA相對表達量，以此進行各組間比較，MG(0.24±0.02)的ITFmRNA的表達低于NG(0.27±0.01)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);各治療組的ITFmRNA的表達均高于MG，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05); HDG（0.58±0.03）的ITFmRNA表達高于SASP（0.55±0.02）、MDG（0.50±0.03）和LDG（0.43±0.03），差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);MDG的ITFmRNA表達高

9、于LDG，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05); SASP的ITFmRNA的表達高于MDG、LDG，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　5、結(jié)腸組織EGF表達比較
　　用EGF和GAPDH灰度值相比的值為EGFmRNA相對表達量，以此進行各組間比較，MG(0.26±0.04)與NG（0.24±0.03）比較，差異沒有統(tǒng)計學意義（P＞0.05）;HDG（0.42±0.03）與SASP（0.41±0.02）相比，的EGFmRNA

10、表達比HDG低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);LDG的EGFmRNA表達低于MDG，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05); MDG、LDG的EGFmRNA表達比SASP低，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　6、結(jié)腸組織MAPK/ERK表達比較
　　以MAPK/ERK和GAPDH灰度值相比的值為MAPK/ERKmRNA相對表達量進行各組間比較，MG（0.27±0.01）的MAPK/ERKmRNA表達高于NG（0.24±

11、0.01），差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;各治療組與MG比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);HDG（0.51±0.02）的MAPK/ERKmRNA表達高于SASP(0.49±0.01)、MDG（0.48±0.11）、LDG（0.41±0.01），差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);SASP與MDG相比，差異沒有統(tǒng)計學意義(P＞0.05);LDG的MAPK/ERKmRNA表達低于MDG，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。