核果類(lèi)果樹(shù)胚珠培養(yǎng)及子葉再生體系構(gòu)建.pdf

1、桃、李、杏等核果類(lèi)果樹(shù)具有豐富的種質(zhì)資源,早熟品種選育取得了顯著的成績(jī),遠(yuǎn)緣雜交研究在種質(zhì)創(chuàng)新與品種選育方面意義深遠(yuǎn),而早熟品種與遠(yuǎn)緣雜交種都存在胚敗育問(wèn)題以及桃、杏存在外植體再生困難的問(wèn)題,制約著果樹(shù)種質(zhì)創(chuàng)新與育種研究的進(jìn)程,研究并建立胚珠培養(yǎng)程序及桃、杏高效再生體系,有望解決緣遠(yuǎn)雜種胚及早熟品種胚的早期敗育問(wèn)題,同時(shí)為核果類(lèi)果樹(shù)組培快繁及遺傳轉(zhuǎn)化等相關(guān)研究提供技術(shù)支持,針對(duì)目前胚珠培養(yǎng)及再生研究在果樹(shù)育種等相關(guān)研究中存在的局限性,試

2、驗(yàn)以不同早熟桃品種、杏及桃×杏、杏×李胚珠為試材,研究了遠(yuǎn)緣雜種胚敗育的發(fā)生,探討了胚珠培養(yǎng)及幼胚子葉再生的相關(guān)影響因素,建立了凱特杏、桃早期胚珠培養(yǎng)程序,并對(duì)胚珠培養(yǎng)獲得幼胚子葉進(jìn)行不定芽誘導(dǎo),建立了杏、桃幼胚子葉再生及后期培養(yǎng)整個(gè)培養(yǎng)程序,最終獲得了健康正常的不定芽植株,主要研究結(jié)果如下: (1)盛花后25d的凱特杏胚珠 (PF=0),尚未可見(jiàn)胚;生長(zhǎng)培養(yǎng)中,SH培養(yǎng)基較MVT適宜于胚珠生長(zhǎng),珠被劃傷有利于胚珠的生長(zhǎng)發(fā)育;以

3、MS為基本培養(yǎng)基,BA與NAA結(jié)合誘導(dǎo)能力強(qiáng);試驗(yàn)采用誘導(dǎo)方式獲得了可見(jiàn)胚,誘導(dǎo)出胚率為80﹪. 盛花后25d、35d取樣的凱特杏胚珠,培養(yǎng)后獲得幼胚子葉,誘導(dǎo)不定芽的適宜TDZ濃度為1.25mg/L,誘導(dǎo)出芽率分別為85.00﹪、80.00﹪:盛花后50d-55d之間取樣的材料,適宜TDZ濃度為2.50mg/L,出芽率分別為:65.00﹪、60.00﹪,而盛花后60d取樣的材料,適宜TDZ濃度為5.0mg/L,出芽率為61.1

4、1﹪,不定芽主要發(fā)生在子葉的近軸面、胚軸連接處及子葉近軸端兩側(cè). 在25℃進(jìn)行21d暗培養(yǎng),盛花后35d、50d、55d和60d材料出芽率分別為72.22﹪、65.00、60.00﹪和55.56﹪:4℃下28d暗培養(yǎng),35d、50d、55d和60d依次為59.09﹪,71.42﹪、77.78﹪和86.36﹪. (2) 不同桃品種間,胚珠培養(yǎng)成胚率有差異,盛花后28d、40d、48d的不同品種,均表現(xiàn)為早紅2號(hào)最高,千年紅

5、次之,曙光最低;其中早紅2號(hào)盛花后28d成胚率達(dá)42.86﹪. 盛花后48d的早紅2號(hào)胚珠培養(yǎng)獲得的幼胚子葉,在TDZ濃度0.5mg/L下,誘導(dǎo)率為69.69﹪;盛花后48d的千年紅、早紅2號(hào)、早露蟠桃,在1.0mg/L的TDZ濃度下處芽率分別為:62.50﹪、50.00﹪、56.00﹪. (3)通過(guò)以上研究,建立了凱特杏、桃早期胚拯救四級(jí)培養(yǎng)體系,即①胚珠培養(yǎng),獲得可見(jiàn)胚(一級(jí)培養(yǎng));②幼胚生長(zhǎng)培養(yǎng)(胚培養(yǎng)),獲得健壯