用于單子葉植物轉(zhuǎn)化的幾丁質(zhì)酶基因載體構(gòu)建及玉米再生體系建立.pdf

1、真菌性病害長(zhǎng)期以來(lái)一直是限制玉米產(chǎn)量、影響玉米品質(zhì)的主要病害，嚴(yán)重影響著玉米生產(chǎn)的發(fā)展。常規(guī)育種技術(shù)不僅育種周期長(zhǎng)，耗時(shí)費(fèi)力，難以滿足生產(chǎn)上對(duì)抗病良種的需要，更重要的是玉米抗性資源比較缺乏，限制了傳統(tǒng)方法在玉米抗病育種中的成效?；蚬こ碳夹g(shù)在玉米育種上的應(yīng)用，可以將存在于其它物種的抗病基因引入到玉米種質(zhì)材料中，提高玉米抗病性，加速抗病育種進(jìn)程。故本研究從原核表達(dá)載體pETChi上切下幾丁質(zhì)酶基因片段，取代植物表達(dá)載體pBIUA上的Res

2、基因片段，構(gòu)建含ubi啟動(dòng)子和幾丁質(zhì)酶基因的適合于單子葉植物表達(dá)的載體pBIUC，以期將幾丁質(zhì)酶基因?qū)胗衩變?yōu)良自交系，為增強(qiáng)玉米對(duì)真菌性病害抗性的研究做準(zhǔn)備。 植株再生體系的建立，是植物基因工程操作的基礎(chǔ)。本研究選取目前國(guó)內(nèi)大面積種植的6個(gè)玉米骨干自交系，以幼胚作為外植體，誘導(dǎo)出愈傷組織，并選擇愈傷組織誘導(dǎo)率較高的綜3、鄭58和K12三個(gè)品種建立再生體系，同時(shí)研究了影響幼胚再生的各種因素。研究表明：2，4-D對(duì)玉米幼胚愈傷組織

3、誘導(dǎo)率有很大的影響，愈傷誘導(dǎo)的2，4-D最佳濃度為2.0mg/l；胚性愈傷組織的誘導(dǎo)在很大程度上依賴于基因型，從最高誘導(dǎo)率93.1﹪(綜3)到最低誘導(dǎo)率24.4﹪(昌7-2)；玉米幼胚愈傷組織分化成苗時(shí)不同基因型所需的最適6-BA濃度也不同，綜3的愈傷組織分化成苗的最佳6-BA濃度為1.5mg/l，鄭58和K12愈傷組織最適分化成苗的6-BA濃度均為1.0mg/l；本試驗(yàn)建立的移栽程序：分化培養(yǎng)基→再生培養(yǎng)基→花盆中基質(zhì)培養(yǎng)，可以使移栽

4、成活率達(dá)80﹪以上。 本研究選取幼胚再生體系建立時(shí)表現(xiàn)最好的基因型綜3為材料，以其成熟胚作為外植體，利用正交試驗(yàn)研究了2，4-D、6-BA、NAA、脯氨酸和水解酪蛋白5個(gè)因素及組合對(duì)綜3成熟胚愈傷組織誘導(dǎo)的影響，探討了正交設(shè)計(jì)應(yīng)用于玉米培養(yǎng)基篩選的可能性。同時(shí)對(duì)誘導(dǎo)出的愈傷組織進(jìn)行分化培養(yǎng)，以期建立該基因型玉米的成熟胚植株再生體系。研究表明：綜3成熟胚愈傷組織誘導(dǎo)的最佳激素組合是2，4-D(2.5mg/l)+6-BA(1.5mg