楊樹再生體系的建立及Bar基因轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、　　本試驗(yàn)以楊樹優(yōu)良品種84K楊為受體，探討了在84K楊再生過程中，各種因素對(duì)84K楊組織培養(yǎng)再生體系的影響，旨在建立具有良好的穩(wěn)定性和重復(fù)性，易于再生，有很高再生頻率的植物基因轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)，為提高84K楊再生效率和遺傳轉(zhuǎn)化效率提供理論基礎(chǔ)。 本文將真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌中以獲得工程菌，并在此基礎(chǔ)上通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法試圖將抗除草劑Bar基因轉(zhuǎn)入84K楊中，并對(duì)84K楊遺傳轉(zhuǎn)化體系做了深入的研究，旨在選育出抗除草劑楊樹新品種，為工廠

2、化育苗建立基礎(chǔ)，并為研究楊樹及木本植物的遺傳轉(zhuǎn)化，基因結(jié)構(gòu)和表達(dá)等分子生物學(xué)內(nèi)容提供很好的研究材料和理論基礎(chǔ)，具有重要的理論和現(xiàn)實(shí)意義。試驗(yàn)研究結(jié)果如下： 1.建立了腋芽直接萌發(fā)的快速增殖方法。確定了84K楊腋芽增殖的最適外植體為一年生嫩莖段，最適培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L，為快速獲得試管苗和葉片不定芽的誘導(dǎo)提供了前提，并為保持84K楊優(yōu)良無性系遺傳特性提供了基礎(chǔ)。2.建立了84K楊葉片不定芽直接

3、分化體系。84K楊葉片外植體不定芽直接分化的最佳外植體是從繼代3次以內(nèi)的試管苗上所取的葉片，最佳培養(yǎng)方式是不經(jīng)過暗培養(yǎng)直接在光/暗14/10h條件下培養(yǎng)，葉片不定芽直接分化的最佳培養(yǎng)基是初期在MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L上培養(yǎng)，待芽長到1cm左右，可轉(zhuǎn)到MS+KT1.0mg/L+NAA0.1mg/L上進(jìn)行不定芽的壯苗培養(yǎng)。3.進(jìn)行了84K楊不定芽生根的研究，大量元素減半的1/2MS培養(yǎng)基、7g/L的瓊脂濃度、20g

4、/L的蔗糖濃度是84K楊生根的最佳濃度。4.通過三親雜交法將真核表達(dá)載體pBI121-Bar轉(zhuǎn)入根癌農(nóng)桿菌LBA4404中，為Bar基因轉(zhuǎn)化及農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化提供前提條件。5.確定了在農(nóng)桿菌葉盤法基因轉(zhuǎn)化過程中，適宜的脫菌劑、選擇劑濃度。6.系統(tǒng)地研究了影響農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化效率的各種因素，得到一條最佳轉(zhuǎn)化途徑。然后在選擇培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)。最佳轉(zhuǎn)化途徑的確定，為基因轉(zhuǎn)化效率的提高和84K楊中其它基因的轉(zhuǎn)化提供了技術(shù)基礎(chǔ)。7.共獲得34個(gè)PPT抗性芽