銀杏再生體系建立和LEAFY基因表達(dá)、轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、銀杏(Ginkgo biloba)又名白果、公孫樹(shù),新生代第四紀(jì)冰川期的孑遺植物,為中國(guó)獨(dú)存的珍稀名貴樹(shù)種.中國(guó)是銀杏的故鄉(xiāng),銀杏與大熊貓一樣,已被世界各國(guó)公認(rèn)為中國(guó)代表.銀杏被稱為"活化石",植物學(xué)家常把銀杏與"恐龍"相提并論,在生物的起源、進(jìn)化等研究方面提供了理想的試材和有力證據(jù),具有重要的科學(xué)研究?jī)r(jià)值.銀杏的經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高,隨著銀杏產(chǎn)業(yè)的發(fā)展,銀杏在食品、保健、醫(yī)藥、木材、綠化等領(lǐng)域得到廣泛的開(kāi)發(fā)利用,然而銀杏童期長(zhǎng),實(shí)生苗20-3

2、0a才能開(kāi)花結(jié)果,常規(guī)育種周期較長(zhǎng),嚴(yán)重影響了銀杏的品種改良.目前LEAFY基因被認(rèn)為是誘導(dǎo)植物開(kāi)花的樞紐基因,其過(guò)量表達(dá)可以促進(jìn)植物提早開(kāi)花.研究銀杏LEAFY同源基因的時(shí)空表達(dá)模式有助于我們初步認(rèn)識(shí)LEAFY同源基因的功能.通過(guò)組織培養(yǎng)、遺傳轉(zhuǎn)化等方法從分子水平對(duì)其進(jìn)行改良,可以開(kāi)辟銀杏育種新途徑.我們通過(guò)實(shí)驗(yàn)獲得了以下研究成果:1.裸子植物銀杏組織培養(yǎng)分化特別困難,分別以銀杏胚乳、胚、胚軸、子葉以及不同采收期的未成熟胚為外植體,研

3、究了在不同培養(yǎng)條件下愈傷組織和胚狀體的發(fā)生條件,建立了MK新型培養(yǎng)基配方.2.在國(guó)內(nèi)外首次把胚狀體培育成苗,建立了銀杏組織培養(yǎng)再生體系.3.通過(guò)對(duì)傳統(tǒng)CTAB提取RNA的方法進(jìn)行適當(dāng)改良,建立了銀杏等木本裸子植物RNA的提取方法.4.我們利用同位素標(biāo)記,制備Ginlfy和GinNdly兩個(gè)特異探針,進(jìn)行Northern分子雜交,對(duì)銀杏還沒(méi)有開(kāi)花功能的幼樹(shù)、已開(kāi)過(guò)花的銀杏成年雄株和雌株的根、莖、葉以及幼果、不同時(shí)期的雌花芽、雄花芽進(jìn)行了L