芝麻子葉再生體系的優(yōu)化及轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究.pdf

1、試驗以芝麻子葉為外植體，建立成熟的芝麻植株再生技術(shù)體系并進行了優(yōu)化；同時開展根癌農(nóng)桿菌介導的芝麻轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究。初步確定轉(zhuǎn)基因體系中農(nóng)桿菌最佳侵染時間、抗生素篩選最佳濃度及處理時期等關(guān)鍵技術(shù)指標，獲得抗性植株6株。試驗結(jié)果如下：
　　 1、以子葉為材料，通過不同激素類型和濃度下不定芽的誘導發(fā)生比率分析，得出芝麻子葉誘導叢生芽的最佳培養(yǎng)基是MS+6-BA5.0mg/L+IAA1.0mg/L+ABA1.0mg/L+AgN035.0m

2、g/L+蔗糖3％+瓊脂0.8％，子葉分化率可高達100％;6-BA是子葉膨大的關(guān)鍵因子；ABA是子葉出芽的主要因素。
　　 2、不定芽的增殖：以誘導出的不定芽為材料，在不同培養(yǎng)基類型下進行試管苗增殖比較試驗，得出不定芽增殖的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0mg/L+AgN032.5mg/L+蔗糖3％+瓊脂0.8％；叢生芽數(shù)最多為379個/處理，增殖率高達1184.38％。
　　 3、試管苗生根：將小苗分成單株接入生根培養(yǎng)

3、基生根，得出試管苗生根的最佳培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.2mg/L+蔗糖3％+瓊脂0.8％，平均生根數(shù)最多為8.56條。
　　 4、頭孢霉素抑菌最佳濃度：濃度在0-500mg/L之間對芝麻子葉不定芽的分化率無明顯影響，且濃度為500mg/L時可完全抑制農(nóng)桿菌的生長，因此，頭孢霉素的最佳殺菌濃度定為500mg/L。
　　 5、轉(zhuǎn)基因抗性篩選中的最佳藥劑濃度：從外植體的卡那霉素(Km)和潮霉素(Hyg)抗性篩選試驗可知，子

4、葉塊在Km70mg/L時分化率為8％，在Hyg40mg/L時分化率為14.81％；誘芽在Km70mg/L時芽增殖率為10.71％，在Hyg60mg/L時芽增殖率為20％；生根在Km20mg/L時平均生根條數(shù)為0.39條，在Hyg10mg/L時平均生根條數(shù)為0.5條；因此在以后的篩選試驗中分別選擇亞致死濃度Km70、70、20mg/L，Hyg40、60、10mg/L；
　　 6、在芝麻子葉的遺傳轉(zhuǎn)化中可以省去預培養(yǎng)步驟，子葉適宜的