花生再生體系的優(yōu)化及AhSAD基因啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)化.pdf

1、本研究選用花生品種遠(yuǎn)雜9307、冀甜1號(hào)、羅漢果、花37、白沙1016的上胚軸為外植體，對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)和再生體系進(jìn)行研究，通過(guò)比較不同預(yù)培養(yǎng)時(shí)間、不同激素配比、不同基因型的誘導(dǎo)愈傷差異確立適宜花生上胚軸愈傷組織誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基。分別從體細(xì)胞胚發(fā)生途徑和器官間接發(fā)生途徑探索花生上胚軸離體再生的最佳途徑。確立最適宜的培養(yǎng)條件進(jìn)行19種不同花生品種篩選。在優(yōu)化的再生體系基礎(chǔ)上進(jìn)行農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化。遺傳轉(zhuǎn)化方面，對(duì)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化條件進(jìn)

2、行優(yōu)化，分別從 Km篩選濃度，受體材料、侵染時(shí)間、共培養(yǎng)時(shí)間完善轉(zhuǎn)化流程，將花生Δ9-硬脂酰-ACP脫氫酶基因啟動(dòng)子AhSAD轉(zhuǎn)化不同花生品種的受體材料，獲得陽(yáng)性植株，主要研究結(jié)果如下：
　?。?）預(yù)培養(yǎng)時(shí)間不同，愈傷組織狀態(tài)存在明顯差異，預(yù)培養(yǎng)0d的上胚軸易形成胚性愈傷，預(yù)培養(yǎng)7d的上胚軸狀態(tài)優(yōu)于3d和10d。
　?。?）確定MSB5+Pic3mg/L為最適宜誘導(dǎo)培養(yǎng)基，胚性愈傷誘導(dǎo)率最高可達(dá)60％以上，該類(lèi)培養(yǎng)基適宜本研

3、究中多數(shù)花生品種的愈傷誘導(dǎo)，并可進(jìn)行多次繼代培養(yǎng)得到重復(fù)性體胚發(fā)生培養(yǎng)物。MSB5+Pic3mg/L+Gln1g/L(+)AgNO3（2mg/L）為最佳繼代培養(yǎng)基。
　?。?）愈傷組織進(jìn)一步誘導(dǎo)體細(xì)胞胚發(fā)生的最佳培養(yǎng)基為 MS+0.4mg/L6-BA+0.1mg/LNAA，成苗率最高為46.77％。繼代過(guò)程先在6-BA0.4mg/L+NAA0.1mg/L再生，交替使用MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L成苗狀況較好；

4、愈傷組織誘導(dǎo)不定芽的最佳培養(yǎng)基為 MS+TDZ0.2mg/L+6-BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L，可誘導(dǎo)出不定芽且分化率最高為42％。
　?。?）不同基因型的花生品種在相同的培養(yǎng)基中出現(xiàn)誘導(dǎo)和再生差異，9048,9102出愈率在70％-80％之間,9020,9092,9110出愈率為60％-70％，9059出愈率最低僅為16％。9099,9097再生率在40％-50％之間，9036,9093次之。
　?。?）最終確