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文檔簡介
1、本研究選用花生品種遠雜9307、冀甜1號、羅漢果、花37、白沙1016的上胚軸為外植體,對愈傷組織誘導(dǎo)和再生體系進行研究,通過比較不同預(yù)培養(yǎng)時間、不同激素配比、不同基因型的誘導(dǎo)愈傷差異確立適宜花生上胚軸愈傷組織誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基。分別從體細胞胚發(fā)生途徑和器官間接發(fā)生途徑探索花生上胚軸離體再生的最佳途徑。確立最適宜的培養(yǎng)條件進行19種不同花生品種篩選。在優(yōu)化的再生體系基礎(chǔ)上進行農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化。遺傳轉(zhuǎn)化方面,對農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化條件進
2、行優(yōu)化,分別從 Km篩選濃度,受體材料、侵染時間、共培養(yǎng)時間完善轉(zhuǎn)化流程,將花生Δ9-硬脂酰-ACP脫氫酶基因啟動子AhSAD轉(zhuǎn)化不同花生品種的受體材料,獲得陽性植株,主要研究結(jié)果如下:
?。?)預(yù)培養(yǎng)時間不同,愈傷組織狀態(tài)存在明顯差異,預(yù)培養(yǎng)0d的上胚軸易形成胚性愈傷,預(yù)培養(yǎng)7d的上胚軸狀態(tài)優(yōu)于3d和10d。
?。?)確定MSB5+Pic3mg/L為最適宜誘導(dǎo)培養(yǎng)基,胚性愈傷誘導(dǎo)率最高可達60%以上,該類培養(yǎng)基適宜本研
3、究中多數(shù)花生品種的愈傷誘導(dǎo),并可進行多次繼代培養(yǎng)得到重復(fù)性體胚發(fā)生培養(yǎng)物。MSB5+Pic3mg/L+Gln1g/L(+)AgNO3(2mg/L)為最佳繼代培養(yǎng)基。
?。?)愈傷組織進一步誘導(dǎo)體細胞胚發(fā)生的最佳培養(yǎng)基為 MS+0.4mg/L6-BA+0.1mg/LNAA,成苗率最高為46.77%。繼代過程先在6-BA0.4mg/L+NAA0.1mg/L再生,交替使用MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L成苗狀況較好;
4、愈傷組織誘導(dǎo)不定芽的最佳培養(yǎng)基為 MS+TDZ0.2mg/L+6-BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L,可誘導(dǎo)出不定芽且分化率最高為42%。
?。?)不同基因型的花生品種在相同的培養(yǎng)基中出現(xiàn)誘導(dǎo)和再生差異,9048,9102出愈率在70%-80%之間,9020,9092,9110出愈率為60%-70%,9059出愈率最低僅為16%。9099,9097再生率在40%-50%之間,9036,9093次之。
?。?)最終確
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