甜菜植株再生及轉(zhuǎn)基因體系影響因素的研究.pdf

1、甜菜提供了全球約30％的食糖，是我國兩大糖料作物之一。由于甜菜的高度自交不親和性，常導致優(yōu)良植株基因型的丟失，給優(yōu)良育種材料的保存帶來了很大的困難。植物生物技術(shù)的發(fā)展為甜菜育種開辟了一條新途徑，其中，甜菜組織培養(yǎng)植株再生及快速繁殖體系的建立，是以重組DNA為特征的基因工程研究的前提。
　　 本研究以二倍體純合系甜菜為材料，探索了甜菜植株再生體系；并將連接到植物表達載體上的抗逆基因OsAPX3轉(zhuǎn)化到甜菜體內(nèi)，同時對農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化條件

2、和方法進行了比較研究。主要研究結(jié)果如下：
　　 1.甜菜再生體系的建立
　　 通過對影響再生的各種因素的分析研究，得出直接再生培養(yǎng)基配方：MS+6-BA0.5 mg/L+NAA0.5mg/L；確定再生率較高的外植體為葉柄；直接再生率較高的甜菜基因型編號為9號；愈傷組織誘導培養(yǎng)基配方：MS+6-BA0.5 mg/L+NAA2.0 mg/L；愈傷組織繼代培養(yǎng)基配方：MS+6-BA0.5 mg/L+NAA1.0 mg/L+IA

3、A1.0 mg/L；愈傷組織再分化培養(yǎng)基配方：MS+6-BA0.5 mg/L+ZT0.5 mg/L+NAA0.25 mg/L。
　　 2.甜菜轉(zhuǎn)基因體系的優(yōu)化
　　 對影響農(nóng)桿菌介導轉(zhuǎn)化的因素進行了比較分析，確定轉(zhuǎn)化體篩選劑Km的濃度為100 mg/L；確定最適侵染菌液濃度為OD600=0.3；確定最適侵染時間為10 min；確定外植體與農(nóng)桿菌最適共培養(yǎng)天數(shù)為4 d；確定最適乙酰丁香酮加入濃度為100μmol/L。