貫葉連翹植株再生體系的建立及Hyp基因表達(dá)的初步研究.pdf

1、貫葉連翹是一種藥用植物，具有抗病毒、抗抑郁等作用，金絲桃素是其中的主要活性成分。本論文以貫葉連翹為材料，進(jìn)行了組織培養(yǎng)、再生體系的研究，建立了較為穩(wěn)定的貫葉連翹植株再生體系，為利用細(xì)胞培養(yǎng)大規(guī)模提取金絲桃素奠定了基礎(chǔ)。同時(shí)，在已建立的再生體系的基礎(chǔ)上，進(jìn)行了Hyp基因(貫葉連翹中金絲桃素代謝途徑關(guān)鍵酶的基因)表達(dá)的初步研究，以期為金絲桃素的大量獲取增添一條新的途徑?！　”菊撐牡闹饕Y(jié)果如下：　　研究了基本培養(yǎng)基、生長素、分裂素對(duì)組織

2、培養(yǎng)及快速繁殖的影響，建立了貫葉連翹的快繁體系。結(jié)果表明：MS培養(yǎng)基中添加0.1mg/LIBA和0.1mg/L6-BA最適合貫葉連翹組培苗的繼代增殖；MS培養(yǎng)基中添加0.05～0.08mg/L的IAA可使生根率達(dá)90％以上；經(jīng)過檢測，貫葉連翹組培苗和愈傷組織中金絲桃素含量分別為0.769‰和0.012‰?！　∫载炄~連翹快速繁殖所得到的組培苗的莖段、葉片、根段為外植體，對(duì)再生體系進(jìn)行了研究。結(jié)果表明：在MS(1/2N)培養(yǎng)基中添加0.5

3、mg/L的TDZ或0.5～1.0mg/L的6-BA，莖段不定芽再生效果最好；在MS培養(yǎng)基中添加1.0～2.0mg/L的ZT比較利于葉片的分化；MS(1/2N)培養(yǎng)基添加0.1mg/L的TDZ或0.1mg/L的6-BA比較利于根段不定芽再生。通過本研究，建立了較為穩(wěn)定的貫葉連翹植株再生體系?！　⒛康幕鬑yp克隆到雙元表達(dá)載體pBI121上，構(gòu)建出pBI121-Hyp表達(dá)載體；采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法及基因槍法進(jìn)行Hyp基因表達(dá)的初步研究，得