馬來甜龍竹再生體系的建立及竹子轉(zhuǎn)基因研究.pdf

1、竹子遺傳育種研究比較薄弱。本研究以馬來甜龍竹的成熟種胚為外植體,通過愈傷組織途徑,建立了其高效、穩(wěn)定的再生體系。在此基礎(chǔ)上,結(jié)合本課題組建立的版納甜龍竹的再生體系,開展了轉(zhuǎn)基因研究,初步建立了竹子的遺傳轉(zhuǎn)化體系,為竹子的遺傳改良打下了良好的基礎(chǔ)。主要的研究結(jié)果如下:
　　 1.馬來甜龍竹再生體系的建立
　　 (1)優(yōu)化的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基:MS+蔗糖30g/L+2,4-D3mg/L+谷氨酰胺500mg/L+脯氨酸500m

2、g/L+水解酪蛋白500mg/L+agar8g/L(TypeA),愈傷組織的誘導(dǎo)率達(dá)到85％以上,并且較好的愈傷組織誘導(dǎo)率占30％左右。
　　 (2)優(yōu)化的增殖培養(yǎng)基:MS+蔗糖30g/L+2,4-D0.5mg/L+谷氨酰胺500mg/L+脯氨酸500mg/L+水解酪蛋白500mg/L+agar8g/L(TypeA')。
　　 (3)優(yōu)化的分化培養(yǎng)基:MS+蔗糖30g/L+BA2mg/L+KTlmg/L+NAA0.5mg

3、/L+gelrite0.3％,分化率約45％。本實驗中繼代次數(shù)以2次即6周為最好,愈傷組織繼代次數(shù)4次或5次時,分化率明顯降低,并且易分化出白化苗。
　　 (4)優(yōu)化的生根培養(yǎng)基為1/2MS+蔗糖30g/L+3mg/L的IBA+gelrite0.3％。生根率高達(dá)90％,每個植株的平均誘導(dǎo)根數(shù)為6-7條,最高可達(dá)約15條,誘導(dǎo)出的根的平均長度約3.39cm。
　　 (5)生根的試管苗馴化后移栽到等比例的泥炭、蛭石和珍珠巖的

4、混合基質(zhì)中,植株的成活率達(dá)95％以上。
　　 2.竹子轉(zhuǎn)基因研究
　　 以版納甜龍竹的愈傷組織為受體,通過農(nóng)桿菌把pCAMBIA1301載體相關(guān)DNA片段轉(zhuǎn)入版納甜龍竹的愈傷組織中,通過再分化成功獲得10株抗性再生植株,轉(zhuǎn)化率達(dá)到35.7％。對其進(jìn)行PCR分子檢測及其電泳產(chǎn)物測序,結(jié)果證實潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因已轉(zhuǎn)入竹子的基因組中。
　　 在馬來甜龍竹轉(zhuǎn)基因研究中,愈傷組織在添加潮霉素進(jìn)行篩選培養(yǎng)6周后轉(zhuǎn)移至分化培