利用NiR基因提高水稻及竹子再生能力的研究.pdf

1、在水稻的培養(yǎng)中，愈傷組織的 NiR酶活性與再生能力呈正相關(guān)關(guān)系，且把高再生能力品種NiR基因轉(zhuǎn)入低再生能力品種中過(guò)表達(dá)，可以提高其再生能力。本文通過(guò)測(cè)定不同再生能力竹種愈傷組織NiR酶活性，確認(rèn)NiR酶活性與竹類(lèi)再生能力的關(guān)系；對(duì)高再生能力版納甜龍竹（Dendrocalamus hamiltonii）NiR基因進(jìn)行克隆和功能分析，了解NiR基因?qū)μ岣咧耦?lèi)植物再生能力的影響機(jī)理；并將DhNiR轉(zhuǎn)化水稻和竹子，驗(yàn)證其對(duì)再生能力的影響。本實(shí)驗(yàn)

2、為竹類(lèi)植物再生體系的建立奠定理論和實(shí)踐基礎(chǔ)，主要的研究結(jié)果如下：
　?。?）選取了6種再生能力較好的叢生竹泰國(guó)巨竹（Gigantochloa tekserah）、印尼巨竹（Gigantochloa brevisvagina）、云南巨竹（Gigantochloa felix）、版納甜龍竹（D. hamiltonii）、泰竹（Thyrsostachys siamensis）、灰稈竹（Bambusa polymorpha）和1種再生能力

3、差的散生竹毛竹（Phyllostachys edulis），測(cè)定不同再生能力竹種的愈傷組織NiR酶的活性。研究表明，竹類(lèi)NiR酶活性與其再生能力呈一定正相關(guān)趨勢(shì)。
　?。?）獲得版納甜龍竹NiR ORF區(qū)序列，命名為DhNiR。DhNiR ORF長(zhǎng)度1779bp，編碼591個(gè)氨基酸，編碼蛋白為親水性蛋白，在DhNiR氨基酸序列上有一個(gè)亞硝酸鹽和亞硫酸還原酶鐵硫/血紅素結(jié)合位點(diǎn)。利用In-fusion技術(shù)構(gòu)建DhNiR植物雙元表達(dá)載

4、體。
　　（3）DhNiR表達(dá)載體和空載分別轉(zhuǎn)入水稻愈傷組織（日本晴和中花11），轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基30d后，轉(zhuǎn)DhNiR和空載的日本晴綠點(diǎn)愈傷率分別為27％和17%，轉(zhuǎn)DhNiR和空載的中花11綠點(diǎn)愈傷率分別為37%和30%。目前獲得轉(zhuǎn)DhNiR基因的日本晴和中花11植株分別是18株、12株，獲得轉(zhuǎn)空載的日本晴和中花11植株分別是2株、5株。轉(zhuǎn)DhNiR的日本晴和中花11的愈傷比空載提前1周左右分化出苗。說(shuō)明DhNiR在水稻的再生能