胚胎發(fā)生晚期豐富蛋白基因對水稻細胞的轉化及再生植株的分析.pdf

1、水稻是世界上最重要的禾谷類作物之一,但是在生產中由于病蟲害和不良氣候與逆境的影響危害,水稻的高產、穩(wěn)產受到了嚴重的制約.水稻的抗性轉基因研究在過去的十幾年中取得了重大的進展.以水稻"中作8593"的成熟胚作為材料,在LS+2,4-D2.0培養(yǎng)基上誘導和繼代培養(yǎng)愈傷組織.選擇生長狀態(tài)良好的胚性愈傷組織作為受體組織,利用基因槍,將含有來自大麥的胚胎發(fā)生晚期豐害蛋白LEA基因導入水稻愈傷組織細胞.將轉化后的愈傷組織接種到CARS+Bialap

2、hos8.0和KPRS+Bialaphos8.0的選擇培養(yǎng)基中選擇培養(yǎng),連續(xù)選擇2次,將抗性愈傷組織轉接到附加TK1.0+ZT1.0+BA1.0+NAA0.1的MS培養(yǎng)基上進行再生培養(yǎng),兩個月后得到了轉化再生苗.提取轉化植株的總DNA進行PCR擴增,檢測到轉化植株中含有目的基因片段.電泳結果顯示轉化植株的電泳條帶大小與質粒的電泳條帶大小相同,未轉化植株在相應的位置沒有條帶出現(xiàn).在苗期對轉化植株進行了抗性生理檢測.在鹽脅迫實驗中,使用0.

3、1%、0.3%、0.5%、0.7%、1%五個濃度的NaCl溶液持續(xù)脅迫處理轉化植株和對照植株.轉化植株出現(xiàn)萎蔫死亡的時間較對照推遲了10天以上;在持續(xù)脅迫處理的情況下,轉化植株的全部萎蔫死亡的時間較對照推遲了15天以上.由此明顯地觀察到轉化植株對不同濃度的鹽脅迫都較對照表現(xiàn)出良好的抗性性狀.在水楊酸誘導脅迫實驗中,使用轉化植株依然表現(xiàn)出對照具有較強的抗性.但是對照的POD活性高峰點僅次于No.2.綜合實驗結果表明,LEA3基因導入并整合